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避免心碎色谱:LC故障诊断和优化

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常用的分离、识别和量化的单个组件的混合物,液相色谱(LC)是一个阿森纳的重要工具分析技术用于研究和开发,以及质量控制在范围广泛的行业。

这些行业的分析需求,从食品安全到制药,变得越来越具有挑战性,例如,更复杂的矩阵分析和降低检测极限。对于许多实验室技术人员,LC是他们需要掌握很多的技术之一。对他们来说,确保结果准确、重现性好是必须的,但是能够增加仪器正常运行时间,避免运行样本,实验室和增加吞吐量现在日常的挑战。

在本文中,我们将看看一些常见的问题,可以创建“色谱心痛”和妥协这些目标。一些故障诊断分为类别,还有更多关于系统优化,但都可以有真正的影响,色谱法实现的质量。

故障排除不良连接配件

糟糕的连接配件一直被认为是色谱法的一个主要原因问题,导致峰展宽,分裂,和尾矿,以及分辨率的损失。效果见过UHPLC和高效液相色谱法设置。为了简化连接,许多实验室都采用手拉紧聚合物(PEEK)配件。传统不锈钢配件通常需要两个扳手收紧,同时要求同轴度的油管列入口。这个过程并不简单,尤其是在狭小空间,通常需要一些专业知识。很容易误解的对齐,导致泄漏,或创建一个混合室的列(图1)。

图1:潜在的配件问题包括泄漏连接(上)和混合室(中间)。与油管冲洗列(底部),没有死体积和连接是完美的。

此外,不锈钢配件也可能是不可逆锻造到油管。为正确对齐的配件,配件和油管必须被丢弃,导致浪费时间,挫折,和经济损失。

安捷伦InfinityLab快速连接配件应对这些挑战。独特的设计和专用弹簧关闭机制产生一个确定与零死体积。配件使用一个简单的杠杆机制来提供一个安全的连接多达1300酒吧,无需使用扳手和工具。这个特性使得它们非常容易使用,因此经验较少的色析法的价值的资产。对于空间限制连接太紧的情况下使用这种设计,另一种配件,还包含相同的独特的弹簧机制也可以(安捷伦轮到InfinityLab快速配件)。快速连接和快速把配件每次都创建一个可靠连接,甚至200年之后重新连接。

在故障情况下,可怜的色谱性能并不总是容易跟踪联系。图2显示了如何毛细管被箍充裕,而不是坐在适当的入口,导致尾矿在所有山峰(色谱),导致无效,充当了混合室的列。通过确保正确连接(色谱)、峰值形状对称的。

图2:之前和之后——色谱:尾矿峰值。底色谱:对称的山峰

优化列一生

列一生可以根据样本条件相差悬殊。pH值、温度、缓冲选择,样品的清洁都可以影响列一生。

极端的流动相pH值会影响硅基列稳定,导致可怜的分离。在低pH值,键合相的水解可以导致不一致的保留时间,分辨率变化,增加峰值跟踪。相比之下,使用硅基列在一个基本的环境会导致硅溶解,尤其是当工作八个以上的pH值。

技术使专门为酸性或碱性环境可以帮助延长柱的使用寿命。例如,InfinityLab Poroshell HPH-C18粒子是由独家过程化学修改的多孔层表面多孔粒子提供高pH值稳定。为应用程序选择正确的列条件是至关重要的。图3显示了峰值形状与一列没有高pH值优化环境。注射500年高峰5和6已经失去了决议。在这种情况下,列不为高酸度碳酸氢铵梯度的10。相比之下,图4显示,在相同的条件下,该InfinityLab Poroshell HPH-C18保留峰的完整性,甚至2000年之后注射。
图3:色谱从标准列在碳酸氢铵梯度pH值10。


图4:色谱从InfinityLab Poroshell HPH-C18列碳酸氢铵梯度pH值10。

防止污染物累积

污染物从肮脏的样品可以建立在一个列。结果往往是尾矿和增加压力峰值。之前的样品制备色谱系统中是至关重要的,防止残留累积和的列。甚至看似干净的样本可能仍然有颗粒,可以用一个简单的过滤步骤删除。警卫队列增加一层防御保护分析柱。他们通常在相同的阶段和孔隙大小分析柱,但更短。随着时间的推移,如果累积导致峰值尾矿代替卫兵列。如果这个问题继续下去,也许是时候更换列。

避免柱压力问题

压力是由于流动相的流动阻力通过系统——列可以阻力的主要来源。随着时间的推移逐渐增加压力是正常的,但是过度的压力是一个指示器,是错误的;下降的压力,有时是在泵的结果。有效的方法来防止压力问题包括缓冲过滤解决方案,妥善准备样品来减少污染,并执行定期列冲。我们建议安装autosampler和列之间的管路过滤器移除泵密封碎片,注入器转子碎片,样品颗粒。

密切关注系统压力可以给你一个早期信号系统故障,可以节省宝贵的时间和费用。意想不到的压力变化可能意味着你们的样品需要进一步过滤,或者你有一个部分插入或插入列熔块。其他原因可能包括失败的泵密封,泄漏系统,或管路过滤器需要改变。如果不删除碎片分离之前,它可能会导致系统问题或列问题导致损失的决议。这些问题可以解决困难和耗时。

节省您的时间!

即使是最有经验的色析法,有许多方面需要考虑当最大化一个LC系统的效率和减少停机时间。从松散配件,在优化或插入列,看似小部件可以在你的结果有很大的影响。

仍然没有解决你的色谱法的问题?Chromnews有着丰富的资源来帮助你的生产力和效率最大化LC系统:www.chromnews.com



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