量化在慢性粒细胞白血病微小残留病

由于引入酪氨酸激酶抑制剂(TKIs),慢性粒细胞白血病(CML)已经从一种致命的癌症治疗的慢性疾病。CML是由两个基因的融合,这产生了一个基因产物bcr - abl。这bcr - abl基因融合进而产生bcr - abl激酶,促进骨髓细胞的失控的增长。TKIs抑制bcr - abl激酶活性,使90%以上的CML患者诊断后存活至少五年。¹

虽然TKIs很有效,患者必须经常忍受一生的治疗,因为当前的监测方法bcr - abl转录水平在血液中,索引的治疗效率,不够敏感,不再需要给医生信心TKI治疗(见表1²)。更具体地说,监控循环bcr - abl的黄金标准定量PCR (qPCR),它可以检测到bcr - abl成绩单在浓度降至10000年的一份正常的患者样本册。^3、4低于这个阈值,然而,测试可能返回一个“负面”的结果即使残余癌也称为最小残余疾病仍然存在。结束他们的患者TKI治疗基于察觉qPCR测量在两年内复发近50%的时间。⁵为了防止这种复发,医生通常保持病人药品的整个生命周期。

表1:定量PCR循环监测是当前的标准bcr - abl

方法	目标	灵敏度	优势	缺点
形态	细胞形态	5%	标准	可怜的敏感性
细胞遗传学	染色体结构	1 - 5%	广泛使用	低灵敏度 骨髓只
荧光原位杂交(鱼)	特定的遗传标记	0.1 - -5%	快(1 - 2天)	不检测其他克隆事件吗
定量聚合酶链反应	RNA序列	0.001 - -0.01%	非常敏感的	可怜的标准化 实验室的

不仅是在这些低水平的qPCR不够准确bcr - abl,也可以不可靠。具体的反应条件和引物的身份,调查和参考基因的使用会导致显著的变化bcr - abl测量。一项研究中,调查了bcr - abl在38个实验室水平和比较他们的结果从一个集中的实验室发现,只有58%的qPCR-based实验室方法实现了平均水平bcr - abl区别±1.2倍的参考方法。⁶

病人可以大大受益bcr - abl监控工具,可以检测到低水平的成绩单和更高的精度。TKI治疗产生的副作用,如疲劳、恶心、痉挛,在严重的情况下,肝脏损伤和充血性心力衰竭。^{2、5、7、8}TKIs也昂贵:治疗成本之间的病人每年59000美元和76000美元(美元)。⁹

幸运的是,一个新的测试目前正在FDA审查,这可能会作为qPCR更敏感和可靠的替代品。这个测试,基于液滴数字PCR (ddPCR)技术,可以使医生停止病人的TKI治疗与确定性CML不会返回。这ddPCR-based测试使用相同的PCR试剂、寡核苷酸引物和荧光探针qPCR放大核酸样本。但与qPCR, ddPCR涉及到20000年nanoliter-sized滴样本的分区,在一个单独的PCR反应发生在每个液滴。每滴都只包含几个核酸链,如果其中一个是目标序列,如bcr - abl成绩单,液滴会发出荧光。因为每个核酸链分别放大,数量的一个计数荧光水滴将指示目标序列的数量包含在整个样本。这将使一个病理学家绝对量化目标序列,不需要参考曲线。

ddPCR可以量化bcr - abl浓度低至100000年一份参考副本,一个数量级比qPCR更敏感,且远低于传统的微小残留病的临床截止1000年在CML治疗1参考副本。⁴使用ddPCR分析bcr - abl记录从CML患者表现出更高程度的精度比通过使用qPCR。¹⁰

在过去的六年里,几个研究小组已经开始使用数字开发方法PCR来衡量bcr - abl。^10、11、12这样的研究成果将有助于为数字PCR CML监测成为一个新的标准。实现这一点,不过,ddPCR-based测试仍然需要获得广泛认可的诊所。因此,一些努力来评估的有效性ddPCR在临床的设置。停止TKI研究后的生活,例如,是一个前瞻性临床试验旨在研究CML患者的复发的速度停止TKI治疗后发现是缓解使用qPCR(定义为< 0.01%bcr - abl两年的成绩单浓度)。¹³这些病人将与ddPCR同时被监控,允许调查人员来比较这两种方法。这个试验,这是第一的,预计完成2019年9月,年底可能还会增派更多TKI停止研究。

ddPCR获得临床验收,其灵敏度和可靠性将使医生确定病人的血液以更大的确定性,bcr - abl水平促进聪明决定患者的疗程。随后,该工具将允许医生更自信地停止病人的治疗和防止癌症诊断后,他们的余生生活。

引用

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