UHPLC——强劲的技术来执行
色谱法是分析实验室的支柱全世界与高效液相色谱法(HPLC)代表最大的部分。在高效液相色谱中,样品溶解在液体流动相;然后分为与固定相的交互组件组成化合物的高效液相色谱柱的外套里面。虽然有成熟技术50多年,经典液相色谱遭到质疑——或者补充——在过去的十年的可用性超高液相色谱(UHPLC),能够使用小尺寸粒子创建压力升高超过400条。
高效液相色谱法分离分析世界上的主力
高效液相色谱法通常被视为是最多才多艺的色谱方法,应用化学,bio-analytical科学和医药行业。高效液相色谱法源于其独特的多功能性,普遍适用性非常多样化的分析物的范围;小分子和离子聚合物和生物分子。驱动技术是不断发展的,在主要部分,通过各种各样的可用固定阶段和实施更复杂的技术,如更敏感的探测器,允许健壮且可再生的分离条件。增加了固有优势分析分析,高效液相色谱法是无损,因此适合于制备应用程序。考虑到所有这些应用程序,高效液相色谱法可以看作一种“多刀”色谱技术。
UHPLC作为指定继承人能接管在各个领域?
UHPLC系统具有三个共同的特征:高压力限制,降低系统分散,和一个小整体住体积。第一个属性是关键的支持发展的下标2µm粒子静止阶段。小粒子直径用于UHPLC导致效率的增加,最优速度和液相色谱的传质。因此更高效的分离,提高系统压力限制要求的更高的反压力较小的粒子直径是司机UHPLC的发展1。虽然压力功能可能被视作最重要的技术,后者两个特性是必要的调整,以抵消峰值展宽和保持高分离效率。这是通过整体的设计和再造现代UHPLC样本水湾,flowpaths,连接和探测器。
UHPLC的承诺是什么,我们为什么要过渡到将来UHPLC吗?是速度和增加色谱分辨率。首先,我们可以考虑分析速度和色谱峰容量的增加是一个硬币的两面。典型的增长速度可能会实现,例如,通过从150 mm高效液相色谱柱切换挤满了5µm粒子,通常有8分钟运行时间,对于一个50毫米UHPLC列1.8µm粒子和3分钟运行时间。减少运行时间超过90%是可行的(图1)。这是一个明显的优势对实验室能够双样品分析每个时间单位来实现整体提高实验室效率最大化基础上分析和仪器的效率。
图1所示。分析使用C18 DNPH-derivatized醛和酮的,4.6×150毫米,5μm使用C18柱(高效液相色谱)B, 2.1×50毫米,1.8μm列(UHPLC)。覆盖六个连续运行的A和b UHPLC传输高效液相色谱的方法,可以减少分析时间和溶剂消耗大约90%。
第二,用户需要增加分辨率选择UHPLC。对于只显示小的选择性差异的分析物,使用UHPLC列有助于独立山峰基线解决方案(图2)。如果处理最复杂的样品,解决方案是使用长列的列或串行组合。虽然在这两个设置,增加反压力要求UHPLC仪器能够满足所需的压力等级,后者也将受益于改进的连接的毛细血管和列略微导致额外的列带蔓延。最终决议可以通过使用2 d-lc(二维液相色谱),可以通过高效液相色谱法应用,或者更好的是,作为UHPLC方法。
图2。4.6×250毫米,使用C18 5μm化合物的分析发现在8330年EPA标准溶液(爆炸性化合物14日)被转移到一个使用C18改善,2.1×150毫米,1.9μm列;提高分辨率和峰容量,同时节省大量的时间,示例中,溶剂,和金钱。
虽然节省了时间已经一个好处在生产力分析实验室,这也主要优势集中的方法开发设施。今天,符合UHPLC系统的工程,提供技术解决方案,旨在减少样品,样品时间,例如快autosampler单位。进一步自动化工作流的存在,允许平行列设置通过复杂的阀门或自动混合溶剂/替代,在色谱数据集成系统(CDS)。这有助于有效的方法开发和快速列平衡。
随着需要减少生态足迹在实验室里,UHPLC技术有可能帮助实验室经理迎接这一挑战;流速越低,小柱直径,减少平衡时间和降低总体系统卷都将直接减少分析过程中使用的有机溶剂。最终这导致一个优势:降低整体运营成本!
障碍超越技术约束
讨论的利益考虑,实验室经理可能仍然不愿改变世界的高效液相色谱UHPLC原因超出分析效率和引人注目的结果。
第一个原因是投资,升级到UHPLC是必要的。厂商通过扩大投资组合提供定制UHPLC解决了这个问题的解决方案,允许符合成本效益和特定于应用程序的投资。
其次,实验室转向UHPLC也需要重写他们的标准操作程序,质量检测和验证方法,之前开发的高效液相色谱仪器。预计遗留方法开发高效液相色谱仪器不容易转移到UHPLC仪器。后者的关键仪器的兼容性与不同的应用领域。在理想的场景中,正在开发的方法应该在表现最好的可用的中档UHPLC系统,以优化成本效率高通量仪器。因为这个的重要性,供应商已经提出了系统仿真技术能够模拟系统硬件。
改变从液相色谱UHPLC因此促进通过允许供应商自身的完全向后兼容的高效液相色谱法和UHPLC组合以及选定的第三方工具。
综上所述:UHPLC继续进展吗?
当我们问UHPLC将新的高效液相色谱只能肯定的答案。UHPLC能够解决业务除了面包和黄油的推动者精密的分析UHPLC将继续帮助现代色析法excel结合实验室的最高水平和成本效率最佳性能,速度和可靠性。
参考
1。Fekete, S。,Veuthey J.L.Guillarme D。,2015年。比较最近的申请快速、高分辨率的分离色谱的方法:理论与实践。j . Chromatogr。1408年,1 - 14。
