多年来，Western blotting一直是分子生物学的核心技术。然而，由于该技术的性质，协议可能需要费力的优化，即使这样，结果也可能是高度可变的。在追求一致性和可重复性时，诸如此类的问题可能会成为研究和进展的重大障碍。
多年来，领先的科学期刊一直在发布新的指南，旨在提高西方印迹实验数据的质量和可重复性。随着自动毛细管western blotting的引入，这个目标现在似乎触手可及。
2015年，We-Met功能生物化学设施是在代谢和心血管疾病研究所在图卢兹，旨在围绕功能生物化学提供最新的创新技术和技术支持。重点介绍了自动化western blotting、均质时间分辨荧光(HTRF)介导的生物标志物发现和细胞代谢研究三大创新技术。该设施现在拥有80个用户，包括学术和私人研究的合作伙伴。
最近，我们有幸与We- met设施的创始人和核心经理亚历山大·卢卡斯博士进行了交谈，讨论了western blotting的自动化来自ProteinSimple的Wes和Jess自动化SimpleWestern平台这是一个生物技术品牌，他们在设施中利用这些进步，以及这些进步对研究的影响。
Karen Steward (KS): Wes和Jess的自动化免疫印迹系统与传统的手工免疫印迹有什么不同?
亚历山大·卢卡斯:在过去的30年里，除了电荷耦合器件(CCD)相机取代了放射自显影胶片之外，经典的西方印迹法几乎没有什么变化。自动化毛细管西部的到来是一个真正的技术飞跃。
事实上，这种方法在原理上差别不大，因为我们保留了western blotting的三个关键步骤:分离、固定/转移和免疫揭示。但是由于这些步骤是自动化的，我们获得了可重复性和用户时间的可用性。此外，通过毛细血管可以显著减少所需的样品量。
克斯:在传统系统中使用的抗体是否可以用于自动化系统，或者是否需要专门的试剂?
艾尔:是的，没有任何问题。在过去3年里，我们在平台上开发了200个抗体，其中只有10%的抗体不能转移。
我们与所有现有的抗体供应商合作，不受限制。该设备在所有试剂上的灵活性使我们能够非常有效地优化每一步。有一个很大的社区数据库，里面有用户验证过的所有抗体。我们不需要任何特殊试剂。这是这项技术的巨大优势之一，一切都是开放和可定制的!
KS:传统的西方墨迹通常需要大量的优化才能产生高质量的墨迹。这是同样的情况下，自动化的西方印迹系统，如杰斯?
艾尔:与传统的西方印迹一样，如果你想要高质量的量化，你需要优化。最重要的是，你可以在3小时内只运行25支毛细血管，就可以测试许多条件，以获得良好的线性和饱和条件。
你不能在传统的western blot中测试这么多不同的条件，在很多情况下，那些使用我们设备的人重新学习了“黄金标准”的含义，当涉及到western blot量化时，Jess。
自动免疫印迹对你的研究有什么帮助?你能否告诉我们，在哪些具体领域，这项技术促进了原本不可能实现的工作?
艾尔:杰斯让我们有可能彻底重新思考学院内部的西方污点，也为图卢兹地区的各种初创企业提供了机会。它在心脏病学、神经科学、新陈代谢甚至美容学的许多项目中都为我们提供了帮助。可重复性、所需材料的少量和灵活性使我们能够进行大规模的临床研究，甚至在1kda到440 kDa的蛋白质上产生western blot。
Alexandre Lucas博士接受了技术网络高级科学作家Karen Steward博士的采访。188金宝搏备用
