采访教授弗雷德·克莱默
克雷默教授微生物学部门的一员,罗格斯大学生物化学和分子遗传学。从洛克菲勒大学获得博士学位后,他是哥伦比亚大学的教员的17年,然后搬到他的实验室的公共卫生研究所,在他与他的同事们进行的研究在过去的29年。
选择海洋生物:在动物学你本科阶段的学习后,你完成了博士文森特Allfrey洛克菲勒大学。这种经历如何影响你的未来研究方向?
克雷默教授:我开始成为发育生物学家,我解决问题的孕产妇信使rna是如何存储在青蛙卵母细胞受精后使用。这导致在体外实验的发展,评估存储信使rna。哥伦比亚大学博士后,我继续工作,在体外实验中探测机制指数复制RNA噬菌体的副本,和导致体外选择实验中,RNA种群进化响应复制的抑制剂的存在。不久,核酸分子本身成了我的“实验动物,”和一代新的核酸分子的结构和功能可以用于有用的目的成了我的激情。
选择生物海:你的实验室探索核酸结构的有着悠久的历史。你能描述的一些项目你有从事多年来的一些实验技术开发了吗?
克雷默教授:这里有一些亮点:(1)1989年,我们介绍了插层染料的使用遵循的指数扩增核酸实时,我们注意到时间,需要特定的核酸合成的对数成反比的数量模板核酸最初出现在一个试验(这种方法是实时PCR检测)的基础;(2)与弗雷德·桑格的实验室,我们开发了核酸序列分析的链终止法,我们介绍了肌苷的使用作为一种防止结构模糊的形成在电泳测序结果;(3)我们开发了基于双官能极其敏感的临床化验重组rna作为探针,然后是成倍地放大通过孵化Q-beta复制酶来指示目标存在的数量;(4)我们发明了分子信标,荧光标记,杂交探针黑暗当免费的解决方案,但这在预选的颜色变得明亮的荧光杂交时目标扩增子PCR检测;(5),我们介绍了交互的使用non-FRET标签对淬火接触,从而使许多不同的探针同时使用在高度多元化临床诊断化验。
选择生物海:你目前的研究涉及到定量的极其罕见的突变与癌症有关。你能告诉我们更多关于同轴导管PCR引物和如何使用这些在你的研究?
克雷默教授:同轴导管PCR引物设计启动突变序列的扩增,而忽略相应的野生型序列,即使突变体和野生型的区别只是一个单核苷酸多态性。两个原则构成的选择性和特异性的引物:(1)从热力学角度来看,由于它们形成的混合动力车极短,形成的完美互补的混合动力车与突变的引物目标序列更丰富的比不匹配形成的混合动力汽车底漆与野生型的目标序列;和(2),因为这些短混合动力车只持续不到一秒钟,然后他们分崩离析,因为不匹配的野生型混合动力车持续时间远远少于完全互补突变体混合动力车,更丰富的突变体混合动力车有更高的机会崩溃之前绑定到一个DNA聚合酶比不匹配的野生型混合动力车,迅速崩溃。因此,从野生型序列生成扩增子的概率很低,只有10个突变体目标分子可以通过阈值周期量化值,尽管它们存在于样本包含1000000个野生型目标分子。
选择海洋生物:有多重要你看到液体活检成为指导个体病人的治疗呢?
克雷默教授:癌细胞,不论他们在哪里发生在体内,迅速繁殖,并迅速死亡细胞凋亡和坏死,坏死细胞的基因组DNA是分散,最终在血浆中,那些碎片持续一两个小时。血液样本侵入性远低于,例如,肝活检或肺活检。突变的DNA片段的分析存在于血浆样本可以提供有用的信息关于癌症的诊断,预后和治疗。此外,可以采取血液样本相对频繁,使治疗调整依照个人的特定的医疗状况。
使用液体活检的挑战在于癌细胞的突变DNA片段不太丰富,正常细胞的DNA片段,这就是为什么我们正在开发超选择性PCR引物。希望的组合非常有选择性的多路检测癌症相关的突变,结合的相对轻松地频繁的血液样本,将把癌症通常是致命的疾病,在个体治疗的慢性疾病的早期检测可以调整,以应对相关的突变。
选择生物海:你觉得你最大的成就是什么日期?
克雷默教授:我们实验室开发了一个快速PCR分析,利用五个不同颜色的分子信标导致结核病的细菌的检测,同时指示是否感染耐多药病人可能是细菌,需要更积极的治疗。这个试验,商业化的造父变星,现在被使用在世界各地,并在打击这种疾病方面取得了显著的进展,这是地球上最广泛的感染。
选择海洋生物:其他研究你想从事什么未来?其他项目计划吗?
克雷默教授:我们开发了彩色分子信标,可能使多达35种罕见突变序列估计的数量在一个数字PCR分析,即使检测设备只能区分七个不同颜色的荧光信号。
选择生物科学东南亚非常高兴克雷默教授作为我们的主讲人6年度qPCR和dPCR的进步5月21 - 22日举行,在福康宁酒店,新加坡。
克雷默教授将讨论“多路检测极其罕见突变序列与癌症”
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