让CRISPR朝着正确的方向前进
CRISPR可以说是生命科学中最热门的话题，它继续成为头条新闻。CRISPR廉价、快速、易于使用，已经进入世界各地的实验室，被一些人视为颠覆了一切。
为了解决与当前系统相关的一些问题，IDT最近推出了一种新的CRISPR方法，该方法已被证明可以提高基因组编辑的效力。题目告诉我们Alt-RTM CRISPR-Cas9系统为研究人员提供了许多好处，包括提高效力和安全性。
为了了解更多关于这个新系统以及它如何帮助研究人员，我们采访了Mark Behlke医学博士。IDT首席科学官。
AB: IDT的Alt-RTM CRISPR-Cas9系统是如何克服嵌合单导rna (sgRNAs)的问题的?
Mark Behlke (MB):单导向rna工作得很好，但也有一定的局限性。它们的设计是为了有效地从表达载体中获得单个功能的CRISPR指南，而不是必须依赖于两个单独的rna被合成，然后必须退火后合成(很像shRNA和siRNA的情况，当从表达载体中合成时)。该系统的局限性包括需要克隆/测序表达结构或需要自己的体外转录(IVT) sgrna。IVT sgrna可以工作，但需要在长凳上花费时间和劳动。自制的IVT sgrna很难进行质量控制，研究者必须相信所制备的转录产物质量良好。也许更重要的是，长IVT sgrna是先天免疫系统的强触发器，可以杀死某些类型的细胞。这在塑料适应性细胞系如HeLa或HEK293细胞中不是问题，但在研究原代哺乳动物细胞时可能是一个重大问题。
Alt-RTM产品采用合成RNA寡核苷酸，可以在试管或平板中使用，这意味着现在实验室不需要人工来制作或控制CRISPR指南——它们可以立即使用，就像PCR引物一样。此外，IDT优化了CRISPR RNA (crRNA)和反式激活crRNA (tracrRNA)序列，并仔细添加了化学修饰，以提高功能活性并限制触发免疫反应的风险，从而产生更健康的细胞。
AB:使用你们的Alt-RTM CRISPR-Cas9系统的研究人员有望看到哪些改进?
MB:更快，更少的劳动密集型实验，更高的编辑效率，更低的毒性。
AB:你认为CRISPR/Cas9可以继续从“正确方向的巧妙推动”中受益吗?这种方法在未来的治疗应用中有潜力吗?
MB:是的，这仍然是一项非常年轻的技术，我们应该期待不断的改进。多家制药和生物技术公司已经在研究CRISPR技术的治疗应用。我完全预计，第一个体外和后来的体内医学方法将有助于治疗人类疾病。
AB:我们最近听说了另一个具有巨大潜力的CRISPR系统，CRISPR/Cpf1。这一发现对CRISPR/Cas9意味着什么?
现有的化脓性链球菌(Spy) CRISPR/Cas9系统可以工作，并且有多种来源的工具供研究人员使用。新编辑平台的发现并不能改变现有Spy Cas9系统运行良好的事实。相反，新系统扩展了工具箱并增加了新的可能性。Acidaminococcus (As) Cpf1系统最重要的区别是具有“TTTN”PAM序列与Spy Cas9的“NGG”PAM序列。这扩大了可靶向的序列空间，以包括例如疟疾等富含at的基因组，或能够靶向哺乳动物基因组中富含at的位点。新的CRISPR系统不会使Spy Cas9过时，而是会为研究人员提供更多的选择。
Mark Behlke医学博士接受了Ashley Board的采访。阿什利是技术网络的执行编辑。188金宝搏备用
为了解决与当前系统相关的一些问题，IDT最近推出了一种新的CRISPR方法，该方法已被证明可以提高基因组编辑的效力。题目告诉我们Alt-RTM CRISPR-Cas9系统为研究人员提供了许多好处，包括提高效力和安全性。
为了了解更多关于这个新系统以及它如何帮助研究人员，我们采访了Mark Behlke医学博士。IDT首席科学官。
AB: IDT的Alt-RTM CRISPR-Cas9系统是如何克服嵌合单导rna (sgRNAs)的问题的?
Mark Behlke (MB):单导向rna工作得很好，但也有一定的局限性。它们的设计是为了有效地从表达载体中获得单个功能的CRISPR指南，而不是必须依赖于两个单独的rna被合成，然后必须退火后合成(很像shRNA和siRNA的情况，当从表达载体中合成时)。该系统的局限性包括需要克隆/测序表达结构或需要自己的体外转录(IVT) sgrna。IVT sgrna可以工作，但需要在长凳上花费时间和劳动。自制的IVT sgrna很难进行质量控制，研究者必须相信所制备的转录产物质量良好。也许更重要的是，长IVT sgrna是先天免疫系统的强触发器，可以杀死某些类型的细胞。这在塑料适应性细胞系如HeLa或HEK293细胞中不是问题，但在研究原代哺乳动物细胞时可能是一个重大问题。
Alt-RTM产品采用合成RNA寡核苷酸，可以在试管或平板中使用，这意味着现在实验室不需要人工来制作或控制CRISPR指南——它们可以立即使用，就像PCR引物一样。此外，IDT优化了CRISPR RNA (crRNA)和反式激活crRNA (tracrRNA)序列，并仔细添加了化学修饰，以提高功能活性并限制触发免疫反应的风险，从而产生更健康的细胞。
AB:使用你们的Alt-RTM CRISPR-Cas9系统的研究人员有望看到哪些改进?
MB:更快，更少的劳动密集型实验，更高的编辑效率，更低的毒性。
AB:你认为CRISPR/Cas9可以继续从“正确方向的巧妙推动”中受益吗?这种方法在未来的治疗应用中有潜力吗?
MB:是的，这仍然是一项非常年轻的技术，我们应该期待不断的改进。多家制药和生物技术公司已经在研究CRISPR技术的治疗应用。我完全预计，第一个体外和后来的体内医学方法将有助于治疗人类疾病。
AB:我们最近听说了另一个具有巨大潜力的CRISPR系统，CRISPR/Cpf1。这一发现对CRISPR/Cas9意味着什么?
现有的化脓性链球菌(Spy) CRISPR/Cas9系统可以工作，并且有多种来源的工具供研究人员使用。新编辑平台的发现并不能改变现有Spy Cas9系统运行良好的事实。相反，新系统扩展了工具箱并增加了新的可能性。Acidaminococcus (As) Cpf1系统最重要的区别是具有“TTTN”PAM序列与Spy Cas9的“NGG”PAM序列。这扩大了可靶向的序列空间，以包括例如疟疾等富含at的基因组，或能够靶向哺乳动物基因组中富含at的位点。新的CRISPR系统不会使Spy Cas9过时，而是会为研究人员提供更多的选择。
Mark Behlke医学博士接受了Ashley Board的采访。阿什利是技术网络的执行编辑。188金宝搏备用
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