支持和资源

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细胞外囊泡的研究

明亮的荧光染色法包,清洁染色的电动汽车
ExoBrite™EV膜污渍已经验证了超分辨率dSTORM成像的孤立的电动汽车
验证抗体检测电动汽车标记纯化或bead-bound EVs流式细胞术
验证抗体检测电动汽车在EV提取标记免疫印迹

细胞外囊泡是什么?

细胞外囊泡(EVs)很小,膜结合粒子从细胞和分泌功能细胞信使,把货物从一个细胞到另一个地方。有几个亚型不同功能的电动汽车,货物,和大小,它的范围可以从~ 30 - 1000 nm直径。最小的类型的电动汽车是外来体,这是~ 30 - 150纳米大小。EVs产生称为多泡体的细胞内舱(多功能车辆总线),这本身就是来自内陷的核内体。多功能车辆总线时的囊泡释放与质膜融合并释放其货物。

在生物医学研究中,电动汽车和他们的货物被用作诊断为癌症和其他疾病的生物标记物。电动汽车可以从血液或其它生物体液隔离使用技术,如超速离心法、PEG沉淀,immuno-capture珠子。

电动汽车膜港口跨膜蛋白来自细胞的质膜的起源,通常包括tetraspanin家族的蛋白质(如CD9、CD63、研究)。里面,EVs包含胞质成分如蛋白质和RNA。电动汽车组件可以使用RNAseq等方法进行分析,免疫印迹和流式细胞术。描述的流式细胞术,研究人员可以使用染料,染色电动汽车组件,如膜和核酸和抗体结合tetraspanins或其他感兴趣的蛋白质。

阅读我们的博客文章来了解更多关于电动汽车和他们的增长潜力在医学和研究。

电动汽车分析:小目标,巨大的挑战

电动汽车的小尺寸使他们具有挑战性的处理和分析。在流式细胞仪,电动汽车很难区分细胞碎片和其他小颗粒,与它们的大小或低于一些流血细胞计数器的敏感性的极限。与某些染料染色或抗体可以帮助区分电动车和其他粒子。然而,重要的是要使用不会形成聚合物的污点,因为这些小颗粒可能对彩色EVs本身相混淆。这些总量已经EV和外来体研究人员的不满。

方法用于丰富或净化EVs之前分析也是一个重要因素。用一个简单的挂钩样品浓缩沉淀步骤通常包含大量的non-EV脂质颗粒,这可能也与膜结合染料。这些杂质可以减少使用其他电动汽车净化方法,如尺寸排阻色谱(SEC)或免疫沉淀反应。磁珠必定anti-tetraspanin抗体可以给纯电动汽车集群。然而,这些珠子可能绑定流感很多疏水性染料,如膜染料。

我们筛选大量的抗体和染料来寻找那些污点电动汽车,并显示没有聚合(我最小。e,信号在缺乏电动汽车)。继续阅读下面探索我们验证EV抗体和染料。

看看我们有用的技术技巧EV隔离和检测

技术提示:荧光流式细胞术检测液

在这个科技,我们分享专业知识获得最佳荧光染色法,检测电动汽车。

技术提示:外来体隔离和染色的协议

在这个科技尖端,Biotium科学家提供详细的协议隔离EVs的细胞上清液用PEG沉淀或尺寸排阻色谱(SEC)。

EXOBRITE™EV膜染色试剂盒

EV染色可以信任

ExoBrite™EV膜染色试剂盒是为了克服电动汽车检测的一些挑战。ExoBrite™污渍绑定到电动汽车膜中的分子提供明亮,具体染色流式细胞术的孤立的电动汽车。的一个关键优势ExoBrite™污渍,不像许多其他染料,他们显示没有背景聚集相似规模的电动汽车。同时,与大多数膜染料,ExoBrite™污渍不绑定流感聚苯乙烯珠,这意味着它们可以用来染色bead-bound电动汽车。

ExoBrite™EV膜染色流式细胞术已经验证的染色能力EVs来自几个不同的培养的细胞系,通过几种不同的方法和孤立,包括尺寸排阻色谱(SEC)、聚乙二醇(PEG)的降水、和磁珠免疫沉淀反应(IP)。

ExoBrite™EV膜染色优点:

  • 用于电动汽车通过流式细胞术检测
  • 明亮的荧光和低背景优秀的信噪比
  • 兼容抗体co-staining(不像CellBrite®修复或MemBrite®修复)
  • 染色剂纯化或bead-bound电动汽车
  • 有4颜色灵活的实验设计
SEC-purified MCF-7-derived EVs是沾ExoBrite™EV膜污渍。

更少的背景和更好的覆盖其他电动车污渍

ExoBrite™EV膜染色背景少,更完整的电动汽车比其他经典染料染色染料或竞争对手。EVs是从MCF-7纯化细胞上清液使用尺寸排阻色谱(SEC)。的纯化EVs染色在PBS表示染料(上面一行)。EV人口是封闭的,显示在电动汽车门粒子的比例下降。每个染料也被添加到过滤PBS(底下一行),寻找染料聚合和非特异性背景。红色箭头表示这些染料总量。亲脂性的染料喜欢戴奥给大量的粒子大小相似的电动汽车,使其不适合EV染色。CellMask™的染料量也显示了一个接受聚合在电动汽车门下降。的ExoFlow-ONE™和ExoGlow™染料聚集形式,大多可以封闭的远离真正的电动汽车,但他们也显示都存有不太完整的报道比ExoBrite EVs™膜污渍(点击放大)。
产品 交货/ Em 检测通道 大小 产品目录号
ExoBrite™410/450
电动汽车膜染色设备
416/452 nm 太平洋蓝™ 100年的标号 30111 - t
500年的标号 30111年
ExoBrite™490/515
电动汽车膜染色设备
490/516 nm FITC 100年的标号 30112 - t
500年的标号 30112年
ExoBrite™560/585
电动汽车膜染色设备
562/584 nm PE、Cy®3 100年的标号 30113 - t
500年的标号 30113年
ExoBrite™640/660
电动汽车膜染色设备
642/663 nm APC 100年的标号 30114 - t
500年的标号 30114年

纯化EVs沾ExoBrite™EV膜污渍

SEC-purified MCF-7-derived EVs是沾ExoBrite™490/515电动汽车膜染色(右)。具体染色被认为,相比之下,同样的污点缓冲区(左)。电动汽车被发现CytoFLEX LX流式细胞分析仪的FITC通道。
SEC-purified MCF-7-derived EVs是沾ExoBrite™560/585电动汽车膜染色(右)。具体染色被认为,相比之下,同样的污点缓冲区(左)。电动汽车在CytoFLEX LX流式细胞分析仪在发现了体育频道。

Bead-bound EVs沾ExoBrite™EV膜污渍

流式细胞术的bead-bound EVs源自MCF-7细胞。无污点的电动汽车(灰色)或沾10 x ExoBrite™490/515(绿色)。电动汽车被发现CytoFLEX LX流式细胞分析仪的FITC通道。
流式细胞术的bead-bound EVs源自MCF-7细胞。无污点的电动汽车(灰色)或沾10 x ExoBrite™560/585(橙色)。电动汽车在CytoFLEX LX流式细胞分析仪在发现了R-PE通道。
流式细胞术的bead-bound EVs源自MCF-7细胞。无污点的电动汽车(灰色)或co-stained 10 x ExoBrite™490/515和CD81-CF®568(粉色)。电动汽车被发现CytoFLEX LX流式细胞分析仪FITC和R-PE频道。
流式细胞术的bead-bound EVs源自MCF-7细胞。无污点的电动汽车(灰色)或co-stained 10 x ExoBrite™560/585和CD9 (HI9a) cf®488(粉色)。电动汽车被发现CytoFLEX LX流式细胞分析仪FITC和R-PE频道。

ExoBrite™EV /抗体co-staining膜污点

的一个优点ExoBrite™EV膜污渍是能够co-stain抗体,EV蛋白质分析研究。Co-staining可以并发地执行或顺序,可以执行纯化或bead-bound电动汽车。ExoBrite™EV膜污渍一般EV污渍应该标签所有电动汽车在一个示例中,*允许抗体被用来量化多少EVs表达感兴趣的蛋白质。例如,在我们测试的电动汽车(MCF-7-derived)的tetraspanin CD9是高度和广泛表达。* *我们发现当我们表现co-staining ExoBrite™560/585电动汽车膜染色和CD9 (H19a) cf®488,他们几乎完全重叠的积极的数量(见图,对吧)。

小贴士最佳ExoBrite™/纯化的抗体co-staining电动汽车:

  • 染色纯化EVs 1毫升10 x ExoBrite™(ExoBrite™染色有点减少在同时co-staining 1 x不推荐)
  • 试着开始至少0.1 ug /毫升抗体

*我们已经测试了的电动车,ExoBrite™EV膜污渍标签所有的电动汽车。可能有电动汽车类型用不同的染色的水平。

* * tetraspanin蛋白质的表达水平(CD9、CD61 &研究)和其他蛋白质之间有很大的不同细胞类型和EV来源。

SEC-purified MCF-7-derived EVs彩色第一与ug /毫升CD9 (H19a) cf®488 a,然后用1毫升10 x ExoBrite™560/585电动汽车膜染色。当封闭ExoBrite™560/585-positive粒子,~ 95%也阳性CD9(上面一行)。同样,当大门CD9-positive粒子,~ 95%也阳性ExoBrite™560/585(底下一行)。
CellMask是商标的热费希尔科学;系统生物科学的ExoFlow-ONE和ExoGlow商标。

超分辨率成像

看到超越衍射极限
ExoBrite™风暴EV膜污渍

描述液和EVs成像仍然是一个挑战由于其小尺寸和光学显微镜的分辨率极限。超分辨率显微术重建技术,如直接随机光学显微镜(dSTORM)超越传统光学显微镜的衍射极限,使单分子的亚细胞结构,如电动汽车。

ExoBrite™风暴EV膜污渍是风暴成像的电动汽车和可在四个CF®染料验证风暴。ExoBrite™的560/585已经验证了dSTORM ONI Nanoimager S Mark II,允许精细形态的研究细节和co-staining EV生物标志物如tetraspanin蛋白质CD9、CD63、研究。

ExoBrite™风暴EV膜染色优点:

  • 深入研究电动汽车的形态和结构
  • 可在4 CF®染料风暴成像进行验证
  • 允许抗体co-staining与EV生物标记和定位研究

图像超分辨率dSTORM人类结肠癌细胞系的派生的电动汽车。电动汽车是沾anti-tetraspanin抗体(一个anti-CD9 / CD63 /研究鸡尾酒,所有共轭CF®647,红色所示)与1 x ExoBrite™560/585(青色)。样本准备使用ONI的EV分析器工具和收购利用ONI Nanoimager年代马克二世(英国牛津Nanoimaging)。使用beta发布版版本的CODI数据处理,ONI的基于云的数据分析平台。酒吧是规模500海里(缩小,左面板)和50 nm single-EV板(右)。ONI的影像。

产品 交货/ Em (nm) 激光线(s) (nm) 检测通道 大小 产品目录号
ExoBrite™风暴CF®505 505/519 488年 FITC 100年的标号 30115 - t
500年的标号 30115年
ExoBrite™风暴CF®583 r 583/609 555年或561年 若丹明或
德克萨斯红®
100年的标号 30116 - t
500年的标号 30116年
ExoBrite™风暴CF®647 652/668 633 - 640 Cy®5 100年的标号 30117 - t
500年的标号 30117年
ExoBrite™风暴CF®680 681/698 633 - 640 Cy®5.5 100年的标号 30118 - t
500年的标号 30118年

ExoBrite™流抗体轭合物

验证抗体检测电动汽车标记流式细胞术

最常见的蛋白质作为电动汽车标记CD9、CD63,和研究,tetraspanin家族的成员。虽然这些蛋白质是抗体针对商业供应商,很少有验证或执行对检测电动或液。ExoBrite™流抗体轭合物的设计和验证的流式细胞术提供明亮的背景信号和低的EV标记纯化和bead-bound电动汽车。

ExoBrite™同形像控制流抗体,已被发现在人类细胞中不与任何目标反应和有相同的同形像tetraspanin抗体,也可以作为一个消极的控制。

ExoBrite™流抗体优点:

  • 为检测电动汽车开发标记CD9、CD63,流式细胞术的研究
  • 验证纯化或bead-bound电动汽车
  • 明亮的背景信号和低
  • ExoBrite™同形像控制流抗体可用
  • 颜色可供太平洋蓝色™、FITC和体育频道

抗体纯化EVs沾ExoBrite™流

SEC-purified MCF-7-derived EVs是沾ExoBrite™560/585 CD9流抗体(左)。特定的染色见,相比之下,同样的抗体缓冲区(右)。液在CytoFLEX LX流式细胞分析仪在发现了体育频道。
SEC-purified MCF-7-derived EVs是沾ExoBrite™490/515 CD63流抗体(左)。特定的染色见,相比之下,同样的抗体缓冲区(右)。电动汽车被发现CytoFLEX LX流式细胞分析仪的FITC通道。
SEC-purified MCF-7-derived EVs是沾ExoBrite™490/515研究流抗体(左)。特定的染色见,相比之下,同样的抗体缓冲区(右)。液检测的CytoFLEX LX流式细胞分析仪FITC通道。

产品 轭合物 检测通道 大小 产品目录号
ExoBrite™CD9流抗体 ExoBrite™410/450
ExoBrite™490/515
ExoBrite™560/585
ExoBrite™R-PE
太平洋蓝™
FITC
体育
25个测试
100测试
p003 - 410…P003-RPE
ExoBrite™CD63流抗体 p004 - 410…P004-RPE
ExoBrite™抗体研究流 p005 - 410…P005-RPE
ExoBrite™IgG1同形像控制流抗体 p008 - 410…P008-RPE

ExoBrite™西方抗体轭合物

验证抗体检测电动汽车标记免疫印迹

ExoBrite™西方抗体验证提供明亮的背景信号和低的EV标记CD9、CD63,研究电动汽车提取近红外线荧光免疫印迹。抗体可与两个近红外荧光染料,ExoBrite™680/700和ExoBrite™770/800,提供更大的信噪比为西方墨点法染料与可见光发射。

一个ExoBrite™Calnexin西方抗体检测蛋白质的内质网中没有电动汽车。作为一个负控制评估孤立EV提取物的纯度。

ExoBrite™西方抗体优点:

  • 为检测电动汽车开发标记CD9、CD63,荧光免疫印迹的研究
  • 使用电动车的提取物进行验证
  • 明亮的背景信号和低
  • 2近红外的颜色
  • 消极的控制ExoBrite™Calnexin西方抗体可用

西方检测人类CD9 MCF-7细胞和EV溶解产物使用ExoBrite™680/700 CD9西方抗体,显示浓缩EV CD9的准备。
西方人类CD63 MCF-7细胞检测和EV溶解产物使用ExoBrite™680/700 CD63西方抗体,显示浓缩EV CD63的准备。
西方检测人类研究MCF-7细胞和EV溶解产物使用ExoBrite™680/700研究西方抗体,显示浓缩电动汽车研究的准备。
西方检测人类calnexin MCF-7细胞和EV溶解产物使用ExoBrite™770/800 calnexin西方抗体,显示缺乏calnexin EV预科。

产品 轭合物 大小 产品目录号
ExoBrite™CD9西方抗体 ExoBrite™680/700
ExoBrite™770/800
25个测试
100测试
p003 p003 - 680 - 770
ExoBrite™CD63西方抗体 p004 p004 - 680 - 770
ExoBrite™西方抗体的研究 p006 p006 - 680 - 770
ExoBrite™Calnexin西方抗体 ExoBrite™770/800 p007 - 770

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