杰克逊免疫研究公司。
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山羊反人类免疫球蛋白,Fc特定片段

“反多克隆捕捉试剂是最健壮的一些试剂我用在我的生物物理和生物化学的研究到目前为止。总的来说,anti-Fc试剂无论主机或捕获物种提供了一个健壮的捕捉能力最低大其他物种。”全面审查。

Rupesh Nanjunda,
詹森研发

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反IgE

反IgE

介绍

杰克逊ImmunoResearch鼠单克隆反IgE抗体是最新的除了我们的套件产品适合诊断研究和开发。特定的人类IgE抗体,他们补充我们现有的反人类免疫球蛋白,IgM, IgA抗体。反IgE可用共轭,选择范围的记者分子,包括碱性磷酸酶和生物素使优秀的敏感性。


关于杰克逊ImmunoResearch反IgE的

杰克逊ImmunoResearch反IgE抗体可在两个不同的克隆(ME.114和10 a10),都是mouse-derived单克隆抗体反应人类免疫球蛋白E类和ε(ε)链具体。

杰克逊immunoResearch鼠标反IgE(克隆ME.114数量)(209-002-241)是一系列记者可用共轭分子,适用于检测人类IgE通过各种技术,包括ELISA(酶联免疫吸附试验),侧流免疫测定(LFIA)、流式细胞术、免疫印迹,CLIA(化学发光免疫分析法)。

杰克逊ImmunoResearch鼠标反IgE(克隆a10 10号)(209-002-244)是可用非结合的,旨在用作捕获抗体结合共轭反IgE抗体(克隆ME.114)三明治格式的化验。


特异性

杰克逊ImmunoResearch反IgEε(ε)链特定抗体已经被ELISA检测并显示最小大人类免疫球蛋白,IgM或IgA。图1是一个演示了杰克逊的特异性的免疫印迹ImmunoResearch反IgE抗体(克隆ME.114和10 a10),没有发现其他免疫球蛋白类。我们没有测试过,如果这个抗体检测免疫球蛋白与其他物种。

免疫印迹显示杰克逊ImmunoResearch反IgE的特异性。
图1: 一个。直接的特异性免疫印迹显示杰克逊ImmunoResearch反人类IgE IgE抗体(ME.114)。2μg净化人类免疫球蛋白(免疫球蛋白,IgE IgA,或者IgM表示)被加载到单个井。非还条件下进行sds - page和蛋白质在硝化纤维膜涂抹。印迹被封锁5% BSA在PBS / T和探测与过氧化物酶反IgE (209-032-241在1:10K稀释)。使用ECL污点是可视化。
B。间接免疫印迹显示杰克逊ImmunoResearch反IgE抗体特异性的人类IgE a10 (10)。250 ng净化人类免疫球蛋白(免疫球蛋白、免疫球蛋白、IgA或者IgM表示)被加载到单个井。非还条件下进行sds - page和蛋白质在硝化纤维膜涂抹。污点被5% BSA在PBS / T和探测与反IgE (209-002-2442)在ug /毫升。洗后用PBS / T,污点;探讨了过氧化物酶Anti-Mouse (715-035-150在1:10,000)。使用ECL污点是可视化。
免疫印迹显示检测净化人类IgE杰克逊ImmunoResearch反IgE的减少和非还条件。
图2: 一个。免疫印迹检测显示100 ng净化人类IgE反IgE(克隆ME.114)在减少和非还条件。
B。免疫印迹检测显示100 ng净化人类IgE反IgE(克隆数量10 a10)在减少和非还条件。请注意,ME.114和10 a10将弱信号检测时减少蛋白质,因此不推荐用于应用程序中检测减少IgE是必需的。

灵敏度

杰克逊ImmunoResearch反IgE抗体可用于检测人类IgE从各种来源的敏感性。图3展示了杰克逊的敏感性ImmunoResearch反IgE(克隆ME.114)当用于间接ELISA,显示其检测能力IgE涂层井在两个不同的浓度。图4演示了杰克逊的敏感性ImmunoResearch反IgE(克隆ME.114)使用时以间接ELISA检测IgE纯化不同骨髓瘤和等离子体源。

在不同的涂料检测纯化IgE浓度

检测IgE的间接ELISA与杰克逊ImmunoResearch反IgE。
图3:检测的IgE间接埃利斯一个。板涂上100μl /纯化IgE从人血浆在碳酸盐岩层2或0.2μg /毫升缓冲一夜之间在4摄氏度。的板被300μl / 1% BSA (IgG-Free, Protease-Free牛血清白蛋白001-000-161在PBS / T) 2小时。主要的抗体,反IgE (209-002-241在PBS / T)连续稀释1:3在板和孵化在室温下2小时。二次抗体,过氧化物酶AffiniPure山羊Anti-Mouse免疫球蛋白,Fcγ特定片段(最小值X, Bov小时Sr Prot) (115-035-071在PBS / T),稀释1:20,000孵化的板1.5人力资源。三甲应用和阅读30分钟后在620海里。

检测的IgE等离子体和骨髓瘤

检测人类来自不同来源的IgE的间接ELISA与杰克逊ImmunoResearch反IgE。
图4:检测人类来自不同来源的IgE的间接ELISA。板涂上100μl /澈底地人类IgE指定来源在碳酸盐岩层缓冲2μg /毫升一夜之间在4摄氏度。盘子被与300μl / 1%的牛血清白蛋白(BSA) (001-000-161在PBS / T)在室温下2小时。主要的抗体,反IgE (209-002-241在PBS / T)连续稀释1:3板和在室温下培养1小时。二次抗体,过氧化物酶AffiniPure山羊Anti-Mouse免疫球蛋白,Fcγ特定片段(最小值X, Bov小时Sr Prot) (115-035-071),稀释1:20,000孵化的板1.5人力资源。三甲应用和阅读30分钟后在620海里。

检测的IgE等离子体

杰克逊ImmunoResearch反IgE提供优秀的敏感性,当用于夹心ELISA抗体捕捉伙伴。两个不同的单克隆抗体可用于捕获和检测。在这种格式中,用非结合的反IgE(克隆10 a10209-002-244)作为涂层之前抗体阻断与牛血清白蛋白(IgG-Free Protease-Free001-000-161)。洗后,孵化与稀释样品。检测步骤中,使用一种共轭反IgE抗体,如碱性磷酸酶反IgE (209-052-241)或过氧化物酶反IgE (209-032-241),其次是适当的衬底或可视化技术。图5举例说明了应用程序的直接三明治的量化分析来验证总IgE使用非结合的反IgE从患者样本与一个碱性磷酸酶共轭检测抗体。总IgE(桥/ l)的患者样本中使用这个实验以前的罗氏Cobas总IgE化验。这些结果显示在图5的轴。

总IgE患者样本

从人类血清和血浆样本中检测总IgE的通过直接与杰克逊ImmunoResearch反IgE夹心ELISA。
图5:从人类血清和血浆样本中检测总IgE的直接三明治ELISA。板是涂有非结合的反IgE(克隆10 a10209-002-244)抗体在100μl / 2μg /毫升涂层缓冲一夜之间在4摄氏度。300μl /良好的板被1% BSA (001-000-161在磷酸缓冲盐),0.05%渐变®(PBS / T)为1.5小时。孵化与100μl /血浆/血清样本稀释接触PBS / T 1小时。检测抗体,杰克逊ImmunoResearch碱性磷酸酶反IgE (209-055-241),是稀释在PBS / T和孵化1:10,000 100μl / 1小时。100μl / DEA的刚做好的衬底被孵化的板30分钟在405 nm和阅读。

建议稀释因素

稀释因素建议在下表中给出了范围,因为许多因素的最佳稀释是一个函数,如抗原密度、渗透率等。最优工作稀释应确定为每个应用程序经验。


显示稀释表
应用程序
共轭 ELISA 西方的屁股* 流式细胞术
非结合的 10 - 20µg /毫升
FITC 1:50-1:200
R-PE 1:50-1:200
辣根过氧化物酶 1:5,000-1:100,000 1:5,000-1:100,000 (non-ECL)
1:10,000-1:200,000 (ECL)
碱性磷酸酶 1:5,000-1:50,000 1:5,000-1:50,000
Biotin-SP(使用Fluorophore-Conjugated链霉亲和素) 1:200-1:1,000
Biotin-SP(使用enzyme-Conjugated链霉亲和素) 1:20,000-1:400,000 1:20,000-1:400,000

*请注意,这种抗体将弱信号检测时减少蛋白质,因此不建议应用检测减少了免疫印迹的IgE是必需的。


引用

  • 考克斯L。Larenas-Linnemann D。在业,r . Passalacqua, G。,2010年。说同一种语言:世界过敏组织皮下免疫治疗系统性反应评分系统。变态反应与临床免疫学杂志,125(3),载《- 574. e7。
  • Pawankar, R。Canonica, G。霍尔盖特,S。在业,R。,2011年。世界变态反应组织(WAO)白皮书过敏。英国:沃。
  • Sanchez-Borges, M。Ansotegui, i &考克斯l .世界过敏组织评分系统对系统性过敏反应:是时候讲同一种语言时过敏反应。咕咕叫治疗选项过敏6,388 - 395 (2019)。https://doi.org/10.1007/s40521 - 019 - 00229 - 8
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