利用荧光生物传感器测量实时细胞呼吸和线粒体功能的多模式检测模型的优化

细胞代谢表征正在通过开发旨在提供易于使用、更高通量和多路数据标记分析的新工具得到帮助。其中一种工具是与多种细胞基质兼容的简单混合测量法，利用荧光探针测量耗氧率(OCR)、细胞外酸化(ECA)和细胞内氧水平，有助于告知电子传递链(ETC)和糖酵解通量的活性。这些探针可以使用标准荧光、时间分辨荧光或寿命荧光检测，并根据检测模式减少背景和增加信号动态范围。生物传感器在所有三种荧光模式下的识别优化是在微板格式下使用多种细胞系和药物化合物处理完成的。特别强调的是，寿命时间分辨荧光模式用于产生药物化合物对OCR的剂量反应(μs/hr)，呈现转化为氢离子尺度的酸化率(ECA[H+]/t)的精确比较，并将寿命检测转化为细胞内氧气(% O2)，同时在活细胞2D单层中进行荧光成像。

分析概述和检测原理

MitoXpress®Xtra -细胞外耗氧测定法[HS法]、pH-Xtra™糖酵解测定法和MitoXpress®细胞内氧测定法是Luxcel Biosciences设计的荧光探针系列，用于辅助各种生物基质中线粒体功能、代谢和毒性的实时分析。探针具有化学稳定性和惰性，可溶于水，并可复配。荧光信号量与样品中细胞内或细胞外O2成反比，或与细胞外H+成正比。细胞内O2水平(% O2)、细胞外耗氧率(OCR)和H+水平的定量是根据荧光信号随时间的变化计算的。探针可以通过在试剂盒插入中使用验证协议进行湿测试进行优化。最佳的检测参数，然后可以应用于验证细胞系和细胞播种密度使用复合控制。应进行独立测试，以分别优化每个细胞系。