三或四检测GPC是一种行之有效的技术大分子的准确描述。增加先进的探测器光散射等,结合浓度探测器,克服了传统方法的限制GPC列校准并提供绝对分子量测定。此外,粘度计测量固有粘度可以添加到显示或计算结构差异程度的分支。简单地说,先进的检测和多种类型的探测器,允许更多、更准确,信息获得从一个注入。
在决定传统列GPC分析校准不足够,你可能会问自己几个问题。
这一技术注意调查几种常见多探头GPC配置和论述了模块化的权衡探测器和集成的探测器。
模块化探测器设置(图1)提供的好处增加多个系统灵活地移动探测器。然而,移动探测器的好处来的成本增加死体积探测器之间没有温度的控制。集成探测器设置(图1 b)最小化inter-detector油管通过将所有探测器在附近温度控制模块。最小化inter-detector体积减少band-broadening和分散样品将从第一个探测器传递给最后一个检测器。Band-broadening导致贫穷的分辨率和灵敏度降低后者的探测器。多探头GPC系统有三个或多个探测器,维护色谱的分辨率在整个系统是实现高质量的关键数据最高的信噪比。
图1:A)的示意图模块化三探测器GPC设置相比,B)一个集成的三重探测器模块。
大多数多探头GPC系统安排所有探测器系列最大化样品浓度和避免与平行分割流探测器。而模块化探测器可以很容易地连接到现有的常规系统与紫外线或折射率探测器,这通常不允许所有探测器留在系列。探测器之间的任何流分裂本质上降低了灵敏度随着样品浓度降低。如果流必须分成两个探测器折射率、粘度计等,必须非常小心,以确保流分裂等于在探测器。之间的油管内径变化探测器应该避免,因为这将有利于在一个方向流动,导致后者更低信号检测器。
评估模块和集成设计之间的差异,1毫克/毫升的浓度105 kDa聚苯乙烯标准1.03准备的多分散性和注入利乐检测GPC系统。注射量是固定在100 uL。不同的多探头配置比较评估band-broadening和信号响应。
在这个比较中,探测器的顺序是固定与各自的探测器系列:紫外线、光散射、折射率、粘度计。图2比较了反应的光散射和粘度计信号集成设计与模块化设计。保留时间的转变来自于不同长度之间的油管探测器。的峰形状稍宽的模块化设计以及轻微下降,峰高。这些差异直接导致从inter-detector增加死体积的模块化设计。在这个比较中,集成的系统有一个inter-detector总额只有340 uL虽然模块化系统有大约680 uL。
图2:比较模块化(紫色)和集成(红色)多探头GPC系统。光散射(顶部)和粘度计(底部)信号可视化显示样本稀释的影响通过添加更多inter-detector油管的模块化设计。
添加一个常见配置先进的检测到现有传统的GPC系统(图3)是通过分裂后流分别列(或第一检测器)和运行到随后的探测器。这允许国际扶轮探测器和粘度计在各自探测器序列。在这两种情况下,这可以保护他们免受额外背压来自后来探测器,可损害国际扶轮流细胞或粘度计压力传感器。
图3:典型的流分割示意图补充说当将先进的探测器附加到一个现有的高效液相色谱法或传统的GPC系统。
的光散射和粘度计性能集成多探头设计与分流模块化设计比较如图4所示。有显著减少光散射检测器的响应峰值变形带展宽。而软件可以添加频带展宽修正,它不能帮助减少光散射的敏感度。这个特定的示例中有一个分子量约100 kDa,相当高的dn /直流0.185,非常狭窄的分布。需要更高的样品浓度来达到质量数据与低分子量的样品,降低dn / dc,广泛的分布。另外,模块化设计的粘度计信号表现出十倍降低信号和显示重大band-broadening稀释。粘度计的灵敏度是强烈依赖于流量,所以伴随流的流量减少分离化合物灵敏度的损失。在这个比较中,集成系统总inter-detector死体积只有340 uL的模块化系统有大约860 uL死体积。
图4:比较模块化分流(紫色)和集成(红色)多探头GPC系统。光散射(顶部)和粘度计(底部)信号可视化显示样本稀释的影响通过添加更多inter-detector油管和分裂之间流动探测器。
在某些情况下,折射率之间的流动分离和先进的探测器会变得不平衡,偏向一个方向。这将是如果现有的传统的GPC系统有不同的油管内径比光散射检测器的油管或粘度计。图5比较了集成多探头GPC分流模块化安装,使用不同直径的油管之间的折射率和先进的探测器。在这个比较中,集成系统总inter-detector死体积仅340 uL而模块化系统约2.3毫升的死体积。光散射峰很扭曲band-broadening和粘度计不是可用的。这个配置不会推荐三或四检测。
图5:比较不平衡的模块化分流(紫色)和集成(红色)多探头GPC系统。光散射(顶部)和粘度计(底部)信号可视化显示样本稀释的影响通过添加更多inter-detector油管和分裂之间流动探测器。
当选择最好的多探头GPC系统时,必须考虑权衡当添加现有传统GPC系统模块化的探测器。尽管模块化探测器提供一些明显的灵活性,一个集成的多探头GPC系统维护列的决议,同时提供所有探测器检测的灵敏度最高,产生最多的信息,和最高的质量。在考虑从传统的系统升级时,不同的选择应考虑以确保关键需求得到了满足。特别是关于粘度计探测器的灵敏度是强烈依赖于探测器被保存在系列。
