改进的抗体药物配合

抗体药物配合(adc)是一个新兴的疗法,包括单克隆抗体与小分子药物。能力目标细胞毒性效应细胞的一个子集,同时保留他人使他们成为一个有吸引力的选择治疗癌症等疾病。然而,分析adc -临床前开发和质量控制的关键步骤,是很困难的,需要改进的分析方法。

在一个新研究发表在分析化学,威斯康辛州大学的科学家们展示一种新的质量spectrometry-based adc的方法,使高通量表征。

188金宝搏备用以利j·拉森说,该论文的主要作者博士生通用电气实验室,以了解更多关于该方法的一些好处,它提供了在现有的分析技术。在这次采访中,伊菜也解释了如何应用adc作为抗癌疗法并突出关键挑战时保证其安全性和有效性。

灰板(AB): adc是如何被应用于抗癌疗法的关键好处是什么?

伊莱j·拉森(EL):这时,adc抗癌治疗的最常见的应用是作为最后的药物。10的11个目前FDA批准adc用于治疗病人不应对传统抗癌疗法或复发或难治性癌症患者。adc的组合两个治疗,半个小分子药物和单克隆抗体(mab)。小分子药物显示高水平的细胞毒和有效杀死癌细胞;然而,他们经常对病人产生有害的副作用。相反,mab展览细胞毒水平低于小分子药物,但是马伯的目标性质限制病人的副作用。结合这些半个ADC的优势使治疗时保留实体弱点都减少,使得ADC抗癌应用程序的“神奇子弹”。

阿瑟:哪些adc的确保安全性和有效性的挑战吗?

埃尔:两个关键挑战的分析adc分子复杂性和adc的大小。任何基于抗体的治疗必须评估各种因素影响药物动力学,约束力的有效性和稳定性。这些包括初级序列变异,c端赖氨酸剪裁,脱酰氨基作用,糖基化变异、氧化和许多其他人。药物共轭过程增加了复杂性造成不同drug-to-antibody比率(DAR),药物由于随机位置异构体药物结合,意想不到的地区可能接合的马伯互补决定区等。使用质谱分析(MS)检测的信噪比分析物随增加分析物的大小。ADC是相对较大的分子实体,大约150 kDa的质量,从而使分析ADC困难特别是阻碍ADC的低丰度变异检测。

AB:一些常见的方法用来评估adc的质量属性。这些方法有什么缺点?

埃尔:ADC分析最常用的方法是自下而上的液相色谱法耦合的串联(LC-MS2)女士和middle-down LC-MS2。自底向上分析使用广泛的酶消化蛋白酶如胰蛋白酶或Lys-C生产肽片段的ADC (< 3 kDa)之前LC-MS2分析。自底向上的消化过程通常是一个耗时的隔夜反应,可能诱发artifactual修改ADC在消化和样品制备过程。此外,电离效率差异修改和未修改的肽使全球分子的定量特征,如改变变异和平均DAR -难以实现。Middle-down LC-MS2提供了一个比自底向上的全球视角,选择使用一个特定的蛋白酶消化ide或KGP紧随其后的是化学还原生产单元~ 25 kDa的大小。这使得全球修改变量的简单定量如改变和平均DAR质但样品制备时间和LC-MS2分析仍~ 3个小时。其他方法,如疏水作用色谱法结合紫外探测器使决心DAR的完整的ADC,前漫长的样品消化过程,但MS-incompatible缓冲条件和进一步的质量属性不能轻易被监控。

阿瑟:你的小组开发了一种快速、高通量的多属性分析方法半胱氨酸adc。你能解释一下这是如何实现的呢?

埃尔:我们的目标在设计这种方法是开发一个快速诊断为ADC通知用户是否可能需要进一步表征ADC。为了使这个方法真正快速我们需要:1)减少或消除样品制备时间,2)减少或消除前端分离所需的时间,3)提高灵敏度和信噪比(S / N),女士和4)增加在MS分析收集的信息的广度。为了实现这一点,我们选择使用自上而下的质谱,而不使用酶消化之前女士分析,消除样品制备时间的最大贡献。因为cysteine-linked ADC模型是完全由非共价相互作用对某些DAR价值观,我们唯一的样品制备步骤是稀释的ADC non-denaturing, MS-compatible缓冲区。消除需要LC女士之前,我们使用气相分离的形式被困离子迁移谱法(蒂姆斯)。蒂姆斯允许碰撞截面(CCS)分析物的测量并提供了一个提高敏感性通过改善信噪比。虽然蒂姆的使用已经增加了收集的信息的广度相对传统的方法,增加了将collision-induced离解(CID)和碰撞细胞CID能量使检测质量完好的ADC (MS1),完整的ADC单元质量(一份),和初级序列分析(MS3)。蒂姆斯女士结合三层方法比传统方法提供更广泛的信息,特别是通过收集完整的ADC质量和CCS的ADC值的确定。尽管先前的技术可以提供更大的主要序列覆盖率比我们发达的方法,我们的技术为用户提供了所需的信息,以确定是否更冗长的分析方法是必要的。

阿瑟:这什么福利提供在现有分析技术用于分析adc吗?

埃尔:主要优势我们的方法比传统的技术分析的速度,和提供的信息广度。虽然以前的技术使用冗长的质消化过程和一到两个小时,我们的方法可以通过简单地应用稀释的分析物在醋酸铵等MS-compatible缓冲,使分析周期性功能等于仪器分析时间。CCS和完整的ADC质量单元的质量和初级序列特征表现在传统方法提供更广泛的信息用更少的时间比传统的技术。独特的小的优势,我们的方法是使用一个修改的,商用仪器。这个仪器被广泛用于执行自下而上LC-MS2分析和我们的方法表明,该仪器的功能远远超过许多用户可能知道。

AB:这种方法可以用于免疫抗体疗法的表征和post-clinical质量控制?

埃尔:这项技术可以用于预处理和post-clinical质量控制快速监测免疫抗体疗法的批次差异产生的结果该方法提供了一个路线图的治疗属性显示从业者是否需要进一步的分子细节。我想象有一天这种方法可用于在线连续生物工艺流程由于速度,提供的信息的广度,易于与自动化样品处理设备。

以利j·拉森说灰板,编辑主任技术网络。188金宝搏备用