细胞外囊泡(EVs)很小,膜结合粒子从细胞和分泌功能细胞信使,把货物从一个细胞到另一个地方。有几个亚型不同功能的电动汽车,货物,和大小,它的范围可以从~ 30 - 1000 nm直径。最小的类型的电动汽车是外来体,这是~ 30 - 150纳米大小。EVs产生称为多泡体的细胞内舱(多功能车辆总线),这本身就是来自内陷的核内体。多功能车辆总线时的囊泡释放与质膜融合并释放其货物。

在生物医学研究中,电动汽车和他们的货物被用作诊断为癌症和其他疾病的生物标记物。电动汽车可以从血液或其它生物体液隔离使用技术,如超速离心法、PEG沉淀,immuno-capture珠子。

电动汽车膜港口跨膜蛋白来自细胞的质膜的起源,通常包括tetraspanin家族的蛋白质(如CD9、CD63、研究)。里面,EVs包含胞质成分如蛋白质和RNA。电动汽车组件可以使用RNAseq等方法进行分析,免疫印迹和流式细胞术。描述的流式细胞术,研究人员可以使用染料,染色电动汽车组件,如膜和核酸和抗体结合tetraspanins或其他感兴趣的蛋白质。

阅读我们的博客文章来了解更多关于电动汽车和他们的增长潜力在医学和研究。

电动汽车的小尺寸使他们具有挑战性的处理和分析。在流式细胞仪,电动汽车很难区分细胞碎片和其他小颗粒,与它们的大小或低于一些流血细胞计数器的敏感性的极限。与某些染料染色或抗体可以帮助区分电动车和其他粒子。然而,重要的是要使用不会形成聚合物的污点,因为这些小颗粒可能对彩色EVs本身相混淆。这些总量已经EV和外来体研究人员的不满。

技术提示:荧光流式细胞术检测液

在这个科技,我们分享专业知识获得最佳荧光染色法,检测电动汽车。

EV染色可以信任

ExoBrite™EV膜染色试剂盒是为了克服电动汽车检测的一些挑战。ExoBrite™污渍绑定到电动汽车膜中的分子提供明亮,具体染色流式细胞术的孤立的电动汽车。的一个关键优势ExoBrite™污渍,不像许多其他染料,他们显示没有背景聚集相似规模的电动汽车。同时,与大多数膜染料,ExoBrite™污渍不绑定流感聚苯乙烯珠,这意味着它们可以用来染色bead-bound电动汽车。

ExoBrite™EV膜染色流式细胞术已经验证的染色能力EVs来自几个不同的培养的细胞系,通过几种不同的方法和孤立,包括尺寸排阻色谱(SEC)、聚乙二醇(PEG)的降水、和磁珠免疫沉淀反应(IP)。

ExoBrite™EV膜染色优点:

• 用于电动汽车通过流式细胞术检测
• 明亮的荧光和低背景优秀的信噪比
• 兼容抗体co-staining(不像CellBrite®修复或MemBrite®修复)
• 染色剂纯化或bead-bound电动汽车
• 有4颜色灵活的实验设计

的一个优点ExoBrite™EV膜污渍是能够co-stain抗体,EV蛋白质分析研究。Co-staining可以并发地执行或顺序,可以执行纯化或bead-bound电动汽车。ExoBrite™EV膜污渍一般EV污渍应该标签所有电动汽车在一个示例中,*允许抗体被用来量化多少EVs表达感兴趣的蛋白质。例如,在我们测试的电动汽车(MCF-7-derived)的tetraspanin CD9是高度和广泛表达。* *我们发现当我们表现co-staining ExoBrite™560/585电动汽车膜染色和CD9 (H19a) cf®488,他们几乎完全重叠的积极的数量(见图,对吧)。

小贴士最佳ExoBrite™/纯化的抗体co-staining电动汽车:

• 染色纯化EVs 1毫升10 x ExoBrite™(ExoBrite™染色有点减少在同时co-staining 1 x不推荐)
• 试着开始至少0.1 ug /毫升抗体

*我们已经测试了的电动车,ExoBrite™EV膜污渍标签所有的电动汽车。可能有电动汽车类型用不同的染色的水平。

* * tetraspanin蛋白质的表达水平(CD9、CD61 &研究)和其他蛋白质之间有很大的不同细胞类型和EV来源。

看到超越衍射极限
ExoBrite™风暴EV膜污渍

描述液和EVs成像仍然是一个挑战由于其小尺寸和光学显微镜的分辨率极限。超分辨率显微术重建技术,如直接随机光学显微镜(dSTORM)超越传统光学显微镜的衍射极限,使单分子的亚细胞结构,如电动汽车。

ExoBrite™风暴EV膜污渍是风暴成像的电动汽车和可在四个CF®染料验证风暴。ExoBrite™的560/585已经验证了dSTORM ONI Nanoimager S Mark II,允许精细形态的研究细节和co-staining EV生物标志物如tetraspanin蛋白质CD9、CD63、研究。

ExoBrite™风暴EV膜染色优点:

• 深入研究电动汽车的形态和结构
• 可在4 CF®染料风暴成像进行验证
• 允许抗体co-staining与EV生物标记和定位研究

最常见的蛋白质作为电动汽车标记CD9、CD63,和研究,tetraspanin家族的成员。虽然这些蛋白质是抗体针对商业供应商,很少有验证或执行对检测电动或液。ExoBrite™流抗体轭合物的设计和验证的流式细胞术提供明亮的背景信号和低的EV标记纯化和bead-bound电动汽车。

ExoBrite™同形像控制流抗体,已被发现在人类细胞中不与任何目标反应和有相同的同形像tetraspanin抗体,也可以作为一个消极的控制。

ExoBrite™西方抗体验证提供明亮的背景信号和低的EV标记CD9、CD63,研究电动汽车提取近红外线荧光免疫印迹。抗体可与两个近红外荧光染料,ExoBrite™680/700和ExoBrite™770/800,提供更大的信噪比为西方墨点法染料与可见光发射。

一个ExoBrite™Calnexin西方抗体检测蛋白质的内质网中没有电动汽车。作为一个负控制评估孤立EV提取物的纯度。