10个细胞培养成功发展的化验的技巧

如何引导

发表:2018年8月1日

亚历山德拉Boussommier-Calleja |,博士学位

细胞培养最初是在1900年代初发展起来的。^1、2它是可视化开发和研究细胞在简单的研究中,从众多的其他细胞和生化分离因素存在于身体。现在无处不在的在生物医学实验室和迅速发展,以满足不断增长的医药需求。传统上,细胞培养被用来生产biotherapeutics如抗体。³现在,细胞培养也已成为一个关键过程在再生医学⁴在药物发现。⁵短暂,细胞生长在菜代替受损细胞的病人,或重建细胞模型,模拟病人的器官来测试药物有效性和安全性。虽然技术进步是重塑细胞培养领域,许多基本步骤仍在实验室这一天手动执行。这意味着协议远非标准化和往往容易变化和人为错误。在这里,我们提供我们认为是必不可少的分析技巧,适合任何与细胞培养开始,可以补充小贴士3 d细胞化验。

主要还是永生化细胞?

你的选择是至关重要的细胞来源:它定义了生理细胞模型的重要性。科学家们主要或永生化细胞之间的选择,也叫细胞系。永生化细胞继续分裂由于基因突变导致他们逃避正常的细胞衰老。相比之下,主细胞扩张能力有限,因此只能通过一定数量的时候,限制细胞的数量可以获得。使用主细胞可能更昂贵和繁琐的,当你需要访问动物或人体组织或从供应商获得他们反复。然而,他们生理上更相关,因为它们是直接从组织中提取,经历少人口翻倍,代表一个不同的和独特的捐赠者。

细胞系非常实用,因为你可以通过他们很多次,而且有许多细胞系特征可用。然而,他们更均匀的基因,看到他们来自相同的原始捐献者。注意,同质性有时可以减少噪音,从而促进获得统计上显著的结果。

最后,尽管它需要专业知识,还可以使细胞后隔离⁶从病人或动物。在当前的种族对个性化医疗,可以说主要细胞有优势,但仔细想想,你是否有合适的预算和设备!

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机械技术

你会惊讶有多少的问题,这是在生物医学领域,甚至到今天。30000研究已确定,使用“错误”的细胞系。⁷在获得你的细胞第一次尝试双止,他们是你想要的。你可以例如染色标记他们来表达。之后,确保你不会污染与其他细胞类型,和非常小心你的标签!

精心准备的细胞

细胞股票是由无数瓶充满细胞都来自相同的原始样本,这是扩大在一起,通过一个类似数量的时期。小心不要犯任何错误在准备你的细胞股票你所有的后续实验将受到影响!例如,确保你标签管适当的细胞的名字,他们通过细胞数量和日期股票。此外,确保不污染或细菌细胞股票与其他细胞类型:换句话说,小心处理细胞股票要相信它可以信任你所有的后续实验。

股票,细胞在细胞的一个解决方案通常resuspended媒体高达10%二甲亚砜(DMSO),在冻结过程中防止冰晶的形成。你也可以加入不同浓度的血清来最大化你的细胞的恢复。DMSO然而可以对细胞有毒,所以确保你的细胞一旦resuspended包含DMSO溶液中,你快把瓶-80°C的冰箱。这意味着你应该贴上瓶这一步之前,这样他们就可以了。小而重要的细节:使用商用的标签可以站起来极端寒冷,否则他们不可能保持长期储存后附着在管!理想情况下,最初的瓶冷冻盒,这个优化的冷却速率传输到-80°C的冰箱。之后,确保你的瓶转移到液氮第二天来保证你细胞的可行性。

始终如一地使用相同的股票的细胞

当你让你的股票的细胞,一定要准备足够的瓶来完成整个实验。细胞之间通常会有很多变化股票由于许多用户或环境相关的因素,甚至不同段落之间由于遗传漂变。使用一个细胞股票将因此减少噪音在你的结果。然而,它总是明智的概括你的实验,其他批次的细胞,或细胞类型进一步沿着路!

轻轻解冻你的细胞!

解冻细胞“第22条军规”:你不能解冻他们太快否则细胞的温度冲击太残酷,但同时你不能太慢,因为DMSO在冰冷的解决方案将损害你的细胞。

不要解冻你的瓶太久,逐步增加,并迅速,新的温暖的媒体你细胞中和DMSO !

一些协议建议立即离心板细胞与新媒体缺乏DMSO溶液。其他人建议跳过离心可以严厉直接将细胞和细胞瓶而稀释DMSO含量通过添加大量的新鲜的媒体。无论是过程是完美的,你的选择很可能随你处理的细胞类型。检查供应商的协议,看看他们推荐。

最小化博览会胰蛋白酶

一般来说,细胞粘附紧密表面的文化,必须使用化学药剂,如胰蛋白酶分离。然而,这些试剂可以对细胞毒性。减少暴露在胰蛋白酶,一旦细胞分离,迅速中和胰蛋白酶的体积胰蛋白酶的媒体,比这大得多。

涂层表面

通常,表面的细胞培养涂以细胞外基质蛋白改善细胞生长,生存⁸或分化。⁹例如,胶原蛋白我可以沉积在烧瓶内改善细胞增殖填充一层的烧瓶胶原溶液至少几个小时。确保洗涂层解决方案与水在细胞培养一些组件的解决方案可能是有害细胞直接接触。

优化媒体要使用

媒体解决方案常常很像黑盒。他们是由一个基础的解决方案,辅以生长因子和血清。添加生长因子可以掩盖您的结果如果你感兴趣他们的内源性分泌试验。此外,不同批次的媒体可以是高度可变的,因为他们通常包含血清(如胎牛血清(的边后卫)),是隔绝的动物。¹⁰因此,在可能的情况下,使用同一批次的媒体对你的实验。无血清如果您可以:研究人员已经表明,转基因没有血清内皮细胞可以生存。¹¹

控制你的细胞confluency

Confluency是细胞培养细胞覆盖面积的测量。瓶细胞越多,他们就越汇合的。一些细胞,增加confluency可以改变形态、增殖,基因表达和生存能力。^12、13许多实验过程要求confluency从60 - 90%,以确保细胞生存和成功。因此,确保你不要让你的细胞增长过于汇合的定期检查他们在显微镜下。如果你没有准备好做实验时细胞已经汇合的,仅仅通过你的细胞,保持一小部分在一个新瓶(所谓的亚文化圈)。注意,原始细胞密度板也很重要:如果细胞的数量放在烧瓶太低他们可能不增长,或他们将非常缓慢。这意味着你不应该削弱细胞太多他们的亚文化。但记得要保持一致。总是通过细胞相同的次数对于一个给定的实验。

检查是否有污染

在体外细胞很容易成为被污染的文化由于化学或生物污染。虽然这是一个庞大而复杂的问题,¹⁴一些污染比其他人更容易探测。例如,您可以检查存在的移动文化在显微镜下的细菌(不与漂浮的细胞碎片混淆)。但是必须使用工具检测支原体商业上可用。在任何情况下,确保你使用无菌技术来减少污染的概率!

由:

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