五种方法来测量免疫疗法效能
免疫疗法有成功的希望,但是他们远离完美。免疫疗法强化免疫系统,帮助它目标并杀死肿瘤细胞。这类治疗被批准治疗至少20种不同的癌症今天,但只有15 - 20%的人接受免疫疗法显示一个持久的反应和副作用并不少见。由于免疫疗法制造过程的复杂性,特别是对于过继细胞疗法如CAR-T细胞疗法、免疫疗法效能很难预测。作为科学家寻求发展更安全、更有效的免疫疗法和扩大达到治疗其他癌症类型,确保细胞产品的一致性是关键,所以选择合适的细胞药效试验。
效能分析应该量化的关键细胞产品的生物活性。对免疫疗法,生物过程的关键是免疫细胞的能力目标和杀死癌细胞。研究人员使用细胞生存能力和细胞毒性分析衡量迅速和完全治疗杀死肿瘤细胞在体外,创建一个基准来衡量性能之间的批量生产的产品。这种定量方法评估效能有助于确保一致性的目的,提高治疗效果。
科学家可以在几个不同的方式检测细胞毒性。这里有五个常用的细胞生存能力分析及其在免疫治疗益处和局限力量测试。
1。
铬释放化验
铬释放试验是一种被广泛接受的细胞生存能力分析。自1968年以来,它一直是最常用的方法来评估过继细胞疗法如CAR-T细胞的细胞毒性。研究负载目标细胞,如肿瘤细胞、放射性同位素的铬,然后使细胞活跃CAR-T或CAR-NK细胞。潜伏期后,研究人员调查的细胞培养基放射性信号。这个信号的强度成正比的靶细胞破坏。
虽然这分析已成为家常便饭,有些实验室从它支持更强大的和敏感的化验。铬释放分析本质上是有限的,一个端点的方法。研究者们只能评估细胞死亡在一个时间点上,这意味着他们不能测量细胞毒性动力学决定杀死率峰值,慢性激活的迹象,或t细胞的疲惫。此外,本试验使用有害辐射。新的化验使用不同类型的信号,毒性较低的用户。
2。
MTT检测
研究人员可以使用四唑盐MTT作为线粒体代谢率的指标,代表细胞的可行性。如果功能、线粒体酶导致肝癌形成紫色晶体,研究人员可以使用分光光度计测量。紫色越强烈,越高数量的可行的细胞中。
许多研究人员使用这种方法来评估的细胞毒性免疫疗法。它是便宜和容易执行,与铬释放化验,它不使用辐射。但就像铬释放化验,MTT检测端点反应,限制研究可以收集的信息量杀细胞免疫疗法的行为。
3所示。 LDH化验
乳酸脱氢酶(LDH)存在于所有细胞,所以化学泄漏时损害细胞膜免疫疗法治疗。因此,LDH的浓度在细胞培养基表明治疗的细胞毒性的大小。
这个分析是一种有效的方法来确定免疫疗法的效力,但需要一个复杂的协议。研究人员测量LDH水平量化索引的活动。LDH将乳酸转化为丙酮酸,然后与四唑盐形成水溶性,红色分子,研究人员可以使用比色法检测。这个红色的浓度与细胞死亡的水平。
如铬释放和MTT化验,LDH化验只在一个单一的时间点测量细胞死亡。这种限制很难评估动力学疗法的效力活动和产生更少的数据计算。
4所示。
Live-cell成像
所有方法的描述到目前为止,live-cell成像是第一个实时测量为辅。研究人员可以监视他们的细胞持续几天到几个月。这种能力是理想情况下很难预测某些事件的时机,比如CAR-T细胞活动的动力学。然而live-cell成像提出自己的局限性。
Live-cell成像使用光学技术监测细胞的文化。当测试过继细胞疗法,研究板工程免疫细胞在肿瘤细胞和地点。但免疫细胞可以阻止肿瘤细胞的观点,使它具有挑战性的可靠地测量细胞死亡。科学家们可以用染料来区分两个细胞群,但这个额外的步骤复杂的协议和风险影响细胞的自然行为。由于数据是视觉,数据分析是主观的,需要一个训练有素的眼睛来解释结果。
5。 Bioelectronic阻抗的分析监测
最新一代的细胞生存能力分析包括bioelectronic化验,解决许多固有的挑战前细胞的可行性分析。Bioelectronic化验启用实时、定量测定杀死肿瘤细胞的免疫细胞介导的不使用染料或标签,可能会干扰细胞的行为。
Bioelectronic化验从一个包含Bioelectronic传感器多井板底部的每个。研究肿瘤细胞板,附着在电极和阻碍电信号。接下来,研究人员加入免疫细胞和看着他们杀死肿瘤细胞。肿瘤细胞死亡和分离,记录阻抗下降。这种非侵入性技术使研究人员能够实时定量测量细胞死亡在几天,几周或几个月。研究人员可以监控细胞死亡动力学和大小在一系列细胞浓度同时帮助研究人员确定疗法的效力。博士Lohitash Karumbaiah,乔治亚大学的副教授,使用这种技术小说的效能评估CAR-T细胞疗法对胶质母细胞瘤细胞。
测量细胞生存能力评估免疫细胞的能力
细胞生存能力分析,特别是那些使免疫细胞瘤交互的实时监控,给研究者一个可靠的方法来分析小说免疫疗法的效力的候选人。Bioelectronic化验提供最好的世界通过使定量、非侵入式的、连续监测免疫细胞动力学。与这些阻抗分析收集到的数据可以帮助开发人员屏蔽无效和有毒biotherapeutic候选人在早期发展过程中,减少的可能性低于标准的治疗方法将离开实验室在制造业。从长远来看,bioelectronic分析将有助于更安全、更有效的治疗需要的病人。
