液:隔离和调查
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液是什么?
液是30至150海里的小泡。他们发现在细胞外介质和体液,如血液、唾液,尿液等等。他们的目的是运输脂质、蛋白质、核酸等大分子受体细胞。起初,他们被认为是“废物”,然而,现在的他们在inter-cell沟通起着关键作用。
他们收到越来越多的关注由于其参与的开发和发展一些疾病,包括神经退行性疾病,肝脏疾病和癌症。
研究它们的功能需要优化和规范用来隔离液的方法。然而,在探索不同的方法之前,值得解释是什么让液很有趣…
为什么液重要?
液是重要的:有三个主要原因
- 他们参与inter-cell沟通。
- 他们一直认为角色在扩散的蛋白质,脂类,信使rna, microrna和DNA与正常和病理过程。
- 他们已经被提议作为潜在的药物传输媒介的作用。他们将封装治疗与细胞膜而不是“货物”合成聚合物由主机具有更好的耐受性。
液和癌症
有越来越多的证据表明,液参与癌症的发展。他们参与炎症反应、血管生成lymphogenesis、细胞迁移、细胞增殖、免疫抑制、入侵,epithelial-to-mesenchymal过渡甚至转移。他们暗示在癌症的发展过程中使它们适合的工具跟踪和追踪癌症。例如,液量的增加在体液可以是一个疾病的迹象。研究似乎表明,有一个液分泌的数量之间的关系以及是否细胞的“状态”——是否“正常”或癌变。例如,纯度更高的癌症细胞分泌更多的液比低级的癌细胞。液的内容来源于癌细胞与“正常”的细胞也不同。这些领域仍需要进一步探索更深入的了解液和癌症之间的关系。
外来体分离和纯化方法
几种方法已经发展为最优的外来体分离。
的主要优点和缺点提出了不同的方法可用下表。
| 外来体隔离法 | 机制 | 优势 | 缺点 | 例子 |
| 差速离心 |
不同的粒子存在于biofluid由微分离心力。 |
它是最常见的方法用于分离细胞外囊泡(EVs)。 它是有成本效益的和非常灵活的生产规模。 分离微泡,凋亡的身体,从生物液体液。 |
它需要专门的仪器,如超速离心法和转子。 隔离效率取决于所使用的仪器。 多步骤的过程耗费时间。 生物流体在离心,因为它之前需要稀释 |
n /一个 |
| 密度梯度离心法 |
它结合了超速离心法和密度梯度分离液从其他不同密度的颗粒。 |
进一步净化细胞外囊泡等共同沉淀蛋白质总量,凋亡的身体或核小体片段。 |
需要额外的清洗步骤。 没有单独的某些脂蛋白和病毒从细胞外囊泡囊泡,因为他们分享相似的密度。 |
Optiprep™ |
| 超滤 |
它使用不同的孔隙大小的膜不同的电动汽车。 |
丰富了电动汽车从小型biofluid卷。 这个过程很容易和快速。 |
可能会导致外来体保留,因为膜的膜蛋白绑定或饱和毛孔。 过滤力可能导致囊泡破裂。 |
PureExo;DiagExo |
| 聚合物沉淀 |
它使用volume-excluding聚合物包装和聚合电动汽车。 |
不需要专门的工具。 隔离是很容易处理的过程。 是高通量和高效的EV隔离。
|
最后的颗粒可能含有脂蛋白。 聚合物的存在可能会影响后续的分析。 |
miRCURY;ExoQuick和总外来体隔离试剂(表达载体) |
| 尺寸排阻色谱法(SEC) |
它是基于不同的孔隙大小的珠子一列。EVs分离和收集基于他们不同的流体力学半径通过列在不同的利率。 |
电动汽车的隔离在一个步骤中完成。 粒子的完整性和生物活性略有改变。 |
不集中电动汽车。 需要优化和re-equilibration之前运行限制尺寸排阻色谱法(SEC)效率。 |
Izon qEV交会 |
| Immunoaffinity捕获 |
表面抗体识别抗原表达的电动汽车。 |
它可以用来隔离EVs总数或特定群体的EVs表达一个独特的抗原。 |
不适合大样本体积。 有异质性抗原表达。 抗体需要可用。 |
MACSPlex外来体设备;Exo-Flow |
| 微流体装置 |
使用不同的或结合技术,如免疫亲和,证券交易委员会和过滤研究电动汽车出现在biofluid在微尺度。 |
它适用于小样本册。 效率高、高灵敏度和低成本的样品分析。 |
设备的高成本是一个主要的缺点。 进一步发展和优化需要它成为临床工具。 |
im, nPLEX;NanoDLD |
结论
总之,当前外来体的定义是基于它们的大小和inter-cell沟通的含义。有人建议,他们可能是信号放大器对癌症检测和治疗一些疾病和潜在工具。然而,为了更好地理解这些细胞外囊泡,研究人员必须先“大师”外来体隔离和净化。
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