使用Lonza 4D-Nucleofector™系统评估VEGFR2 siRNA在Clonetics™HUVEC中的抗血管生成作用

血管生成是大多数癌症的标志，因此是治疗癌症的一个有吸引力的靶点。抗血管生成靶点识别的最简单的筛选和靶点验证策略之一是在康宁的Matrigel™产品中击倒人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的靶点，并评估后续对管形成的影响。

使用小干扰RNA (siRNA)是抑制RNA的策略之一，从而抑制细胞内的蛋白质表达。siRNA可以通过化学转染或基于电穿孔的策略(如Lonza Nucleofector™技术提供的策略)在细胞内传递。
在目前的研究中，我们使用Lonza 4D-Nucleofector™X-Unit转染EGM™2内皮细胞生长介质中培养的单供体Clonetics™HUVEC。用靶向血管内皮生长因子受体2 (VEGFR2)的siRNA转染细胞。使用pmaxGFP™载体对转染条件进行了微调，结果表明，Nucleofection过程对康宁公司Matrigel™产品上HUVEC的管形成电位没有有害影响。

转染VEGFR2- sirna后，VEGFR2蛋白水平被有效敲除。转染24小时后观察到最高的敲除效率。与对照样品相比，VEGFR2-siRNA转染的细胞对康宁生长因子还原Matrigel™产品的管形成有显著抑制作用。由于使用Nucleofector™技术在Clonetics™HUVEC中有效敲除VEGFR2蛋白的时间点可以在转染后24小时内证明，这是一种用于癌症治疗的基于siRNA的抗血管生成疗法的靶点识别、验证和筛选的有效方法。