外泌体和微囊泡:纳米颗粒跟踪分析的表征

虽然支撑纳米粒子跟踪分析(NTA)技术的原理已经在早期的白皮书中描述过，但必须重申的是，使用高强度激光束结合低背景光学配置可以使深亚微米尺寸的颗粒可视化，根据颗粒折射率可测量的颗粒尺寸的较低范围。对于折射率非常高的粒子，如胶体金，可以精确测定直径至15 nm的大小，而对于折射率较低的粒子，如生物起源的粒子，如外泌体，最小的可检测尺寸可能仅为30-40 nm。然而，这种最小尺寸限制允许分析通常远低于大多数商业流式细胞仪300 nm检测阈值的微泡和外泌体。当粒子的布朗运动变得过于有限而无法精确跟踪时，通常是1-2 μm直径时，就会接近尺寸上限。

用来照亮纳米粒子的激光可以被用来激发荧光的激光所替代，这样就可以通过使用适当的滤光片来观察、跟踪标记有荧光分子的纳米粒子，从而精确地测量其大小和浓度。因此，532 nm绿色激光二极管可以用来激发一系列有机荧光团，而深蓝/紫色405 nm激光二极管可以在单个基础上检测半导体CdSe纳米晶体(也称为量子点)，而不是通常的638 nm红色激光。一个488纳米激光二极管可以类似地用于激发更传统的染料，历史上用于流式细胞术。

通过使用抗体介导的荧光团标记特定的外泌体亚群，因此可以实现复杂混合物中的表型。在这方面特别重要的是能够通过抗体(Ab)标记来形成特定的外泌体类型，同时通过分析其布朗运动来测量外泌体的大小，这两种测量是相互独立的。还要注意的是，这种标记的外泌体的浓度仍然可以被回收，并与无论是否标记的类似大小结构的总数进行比较。