快Genome-Edited动物的基因分型

在过去一些年,工程内切酶(Meganucleases ZFN,取得)和CRISPR / Cas9技术革新了基因组编辑的可能性。基因组编辑现在可以用于广泛的物种生成基因失活(淘汰赛)或小核苷酸变化(兄弟)。这些内切酶启动DNA双链断裂修复的异源端加入(NHEJ)或homology-directed修复(HDR)。容易出错的NHEJ通路导致核苷酸插入(ins)或删除(del),称为indels,破坏目标开放阅读框,导致基因失活。单链捐赠者寡核苷酸(ssODN)与单核苷酸或密码子改变目标站点用于使兄弟编辑通过HDR通路。

CRISPR / Cas9,最简单和最昂贵的基因编辑系统,广泛应用于各物种突变的一代。增加吞吐量,需要一个有效的突变检测方法。利用目标基因编辑PCR结合LabChip GX触摸仪器显示目标站点的扩增子和heteroduplex (HD)签名,表明NHEJ是否已经发生,即使它是一个单一碱基对indel。F0和F1代PCR测序应该执行确认确切的核苷酸突变。为进一步生成的基因分析,高清模式仅可用于确定NHEJ是否已经发生。