液体活检:规程和步骤

在这篇文章中，探索一些先进的分子技术，最常用来检测涉及液体活检的主要生物标志物。

液体活检是如何工作的?

一个液体活检包括在从癌症患者收集的体液样本中分离和表征肿瘤来源的物质，如完整的癌细胞或核酸，以获得有关其疾病的信息。¹

由于大多数肿瘤与血液接触，液体活检通常涉及血液样本分析，但其他体液来源包括尿液、粪便、唾液、胸膜液、脑脊液和腹膜液或洗涤液。²

液体活检目标

潜在的名单tumor-derived在液体活检中可以分析的材料包括:

• 循环肿瘤细胞(CTCs)^3.- - - - - -原发和转移性肿瘤脱落的完整癌细胞。
• 循环无细胞DNA (cfDNA)⁴而且循环肿瘤DNA (ctDNA)4-从细胞中释放的DNA片段(cfDNA)和肿瘤来源的DNA片段(ctDNA)。
• 细胞外囊泡⁵-小的膜结合囊泡，包括微囊泡和外泌体，它们可以在肿瘤转移过程中携带货物-如核酸和蛋白质。
• 循环无细胞RNA (cfRNA)⁶-癌症相关的信使rna或非编码rna，包括microRNAs (miRNAs)。

液体活检可以检测到的肿瘤来源物质。来源:科技网络188金宝搏备用

液体活检方案和步骤

液体活检方案侧重于快速检测临床相关信息，具有高灵敏度、选择性和特异性，同时保持微创性。

的液体活检的技术选择取决于目标的性质。例如，它可能涉及CTCs的分离、枚举和表征，或其他肿瘤来源材料的分离和分子分析。

ctc

1. 隔离

在过去的十年里，出现了一些旨在从大量的循环血细胞中分离出ctc，然后对它们进行计数和表征．^3.这些方法中的每一种都利用区分ctc与正常血细胞的关键差异(如差异的基因/蛋白质表达、形态、体积或生物物理特性)来实现对这些非常罕见的细胞的敏感选择和捕获。它们包括:

免疫检测方法这些是最广泛使用的方法，使用抗体选择性地结合细胞表面抗原，区分ctc和血细胞。这些抗体可以与磁性纳米颗粒结合⁷或者固定在微流控芯片的壁上⁸分离ctc。新一代基于CTC抗原的双模态平台将免疫磁珠与微流体相结合。

• 大小相关的隔离技术-包括过滤、微流体、离心和惯性聚焦。
• 直接成像-基于图像的检测方法使用特定的荧光标记来识别和计数血液中的ctc。这些技术中的每一种在样品制备、检测算法和荧光团方面都是独特的。
• 双向电泳⁹- - - - - -它依赖于不同极化的粒子在不均匀电场下的不同运动。

2. 枚举

用于计数样品中检测到的ctc数量的方法包括阻抗¹⁰，高通量成像¹¹，流式细胞仪¹²还有人工智能。

3. 描述

用于表征ctc的技术包括免疫染色、荧光原位杂交(FISH)、测序、定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、表达分析和细胞培养。^3.

电动汽车

迄今为止，由于缺乏简单、高效的方法来获得高纯度的ev，液体活检检测ev的临床应用受到限制。¹³用于分离这些细胞外囊泡的一些主要策略包括超离心、聚合物沉淀、超滤、尺寸排除色谱、亲和隔离和基于微流体的技术。¹³每种方法都有其优点和缺点。

cfDNA / ctDNA

几种方法已经用于量化和检测cfDNA/ctDNA中的肿瘤突变¹⁴-包括液滴数字PCR¹⁵、微珠乳化、放大、磁性(beam)¹⁶新一代基于测序的方法¹⁷(全外显子组或全基因组测序)，深度测序癌症个性化分析(CAPP-seq)¹⁶标记扩增子深度测序(TAm-Seq)。¹⁸ctDNA表观遗传特征的分析，如甲基化特征¹⁹，可以提供有关组织来源的信息。

cfRNA

无循环细胞分析(cfRNA)提供了独特的机会来检测癌症，预测肿瘤的起源，并确定分子亚型。^20.但到目前为止，技术和生物学的可变性，再加上缺乏标准化的方案，阻碍了基于rna的液体活检的临床发展。²¹

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