细胞疗法发展优化电穿孔

细胞疗法是一种新兴的小说一组疾病的治疗选择,从遗传疾病到癌症。随着细胞疗法领域的扩展,越来越多的安全需求和有效的方法将外源遗传物质进入细胞。虽然电穿孔提供了几个优势病毒细胞疗法发展基于矢量的方法,该方法可以带来挑战。

188金宝搏备用有幸跟热费希尔科学的保罗•Kovarcik并了解更多的好处和局限性电穿孔和关键因素影响电穿孔性能。在这次采访中,Kovarcik也告诉我们新的氙电穿孔系统以及它如何地址与电穿孔的挑战,包括如何保存细胞的生存能力和促进扩展。

佐伊Braybrook (ZB):选择的关键好处是什么电穿孔转染细胞疗法的方法发展?

没有保罗Kovarcik (DK):尽管很多收养t细胞疗法的基础工作是使用病毒转导,执行仍有一些局限性。1,添加安全问题因为这些病毒基因组中随机整合,可能会产生意想不到的后果。两个额外的测试要求,如病毒复制能力。最后,在有效载荷的大小有限制,可以通过病毒载体。

相比之下,电穿孔可以用来传递各种载荷包括DNA、RNA和蛋白质包括有效载荷大于10 kb。此外,电穿孔是最常用的方法将基因编辑有效载荷。这些病毒性工程方法可能使更具体的和可控的工程使一个更好的治疗。

ZB:效率是非常重要的细胞疗法制造商。你能告诉我们更多关于氙的性能吗?这与其他方法相比如何?

DK:虽然有donor-to-donor可变性,氙的淘汰赛90%和80%的可行性主要激活T细胞。最终,这意味着总编辑更多的细胞。氙系统的一个优点是,它允许开发者微调电穿孔参数特定于他们的产品或过程。与本课程电穿孔系统,氙气允许用户调整电压(500 - 2500 V),脉冲宽度(ms)外墙面,脉冲数(1 - 10)和脉冲间隔(500 - 1000 ms)。这样,开发人员充分可见性应用于细胞电穿孔脉冲。

ZB:限制与电穿孔的实质细胞损伤可能是由于高电压脉冲。氙如何应对这些挑战,确保细胞的生存能力?

DK:理想的电穿孔过程是一个提供最佳的转染效率和生存能力的平衡。一般来说,一个是以牺牲其他如这个图所示。与主要激活T细胞在这个实验中,电压是最重要的变量影响性能和转染率同时增加电压增加,这也导致生存能力下降。

因为氙为客户提供灵活设定自己的电穿孔参数,这给了他们最好的机会,找到最能满足他们需求的优化条件。

ZB:缩放细胞疗法工作流过程开发临床生产可以是一个挑战。氙如何克服这一问题,使无缝扩展?

DK:在开发的一个关键需求是确保电穿孔条件比例从我们小规模氖转染氙系统而不需要优化。实现等效的性能很重要,不管什么卷我们的客户正在进行。为了达到这个目标,我们的工程团队进行了大量的描述霓虹灯的硬件和耗材来理解它的功能。他们保持了路径长度(电极之间的距离),是生成一个等价的波形和脉冲轮廓的关键。他们也具有温度和压力产生在电穿孔来理解它如何影响性能。从第一个案板最终原型,所有的实验都有霓虹灯控制性能基准。

ZB:细胞经历期间和电穿孔后立即吗?

DK:顶部之间的电荷发射阴极阳极(+)和底部(-)电极在直线。电荷的细胞,一个临时的毛孔打开,出现细胞外和细胞内物质的交换。孔隙的大小和频率取决于细胞膜的组成。例如,很难创建毛孔在刚性等领域的大型油脂。由此产生的膜的完整性和细胞内物质的损失是细胞可能无法恢复。

ZB:热费希尔与性能优化的各种细胞类型的协议数据可用吗?

DK:氙系统,优化电穿孔的为期3天的CD3 / CD28 Dynabead T细胞激活PBMCs和平底锅从新鲜和冷冻材料与我们的文化和有效载荷系统20 - 100细胞/毫升(特别是20米,50米,& 100细胞/毫升)。相同的电穿孔程序适用与其他文化、激活和有效载荷系统。因为我们有了可伸缩性的霓虹灯转染系统,客户可以引用超过140优化协议在我们的数据库中。

ZB:什么是关键变量从工程的角度来看,影响电穿孔性能?

DK:确定的工程因素影响生物性能相关一致的电压和电流被交付给电穿孔。在多孔运行,以确保一致的性能从拍摄到镜头,关键是相互等价的电穿孔以及维护内部压力室消除灭弧的风险。温度也是一个关键变量。它直接影响缓冲的导电率,从而能量传递到细胞,但细胞生存能力是当温度超过阈值的影响。结果,系统内部维护以防止电穿孔协议将导致不安全的温度。最后,以确保可伸缩性的霓虹灯,我们必须确保氙消耗品的电极之间的距离是一样的,在霓虹灯的小费。

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