测量腺相关病毒(AAV)浓度

介绍

病毒开发和生产,重要的是要知道病毒浓度在不同阶段的过程,优化使用的克隆以及产量。例如,实例,如克隆筛选,感染复数(MOI)细胞培养方法是实例的优化和适应当病毒浓度,或病毒滴定度也通常被称为,是感兴趣的。

动态光散射(DLS)可用于病毒发展来衡量药物物质或筛选功能分离良好和稳定的污染物或样本总量。基于新的多角度DLS (MADLS)的粒子浓度测量上可用Zetasizer超,现在可以得到大小和粒度分布以及粒子浓度每人口,在几分钟内。

在这个应用程序中,艾尔建请Zetasizer超的共享数据的评估,三腺相关病毒(AAV)样品的例子所示。浓度结果相比,病毒衣壳基于ELISA结果滴定度分析。

方法

样品都是使用低容量的石英试管(ZEN2112)。Zetasizer超进行测量,使用粒子浓度测量,这给了两个MADLS粒径分布和浓度峰值。当使用这种测量时,需要用户提供的以下参数:

样品材料;测量是利用蛋白质作为材料,当病毒衣壳是由蛋白质外壳。

分散剂材料;分散剂最初设置为水,但粘度后来纠正获得正确的大小和浓度通过编辑粒子浓度的结果。测量尺寸的准确性是粒子浓度计算的关键。缓冲粘度测量使用珠缀[1],我们建议使用一个60 - 200纳米聚苯乙烯乳胶粒。注意,大珠子撒更多,因此没有必要添加尽可能多的样本。

缓冲散射计数率(后向散射角度);缓冲散射强度测量用于测量在同一个试管(ZEN2112),只需设置一个角测量使用后向散射角和设置测量电池的中心位置。作为一个正常的运行测量,使用派生的计数率值的缓冲区散射场的粒子浓度测量。

三个重复测量的运行时间小于4分钟。

结果

强度大小分布的三个AAV样品如图1所示,图C .相应的粒子浓度如图2所示,图C f .写明ATCC AAV2参考示例如图1所示,图,包含聚合,这并不令人感到意外,因为作为这个示例从冻结,解冻,由于低容量可用,直接插入到没有任何pre-filtration试管。然而,尽管存在的总量,MADLS-based粒子浓度给出了浓度值(1.12 x 10¹²粒子/毫升)关联的衣壳ELISA试验(0.92 x 10¹²粒子/毫升)。为进一步的细节总浓度见表1。爱力根的两个AAV样品,有很多更少或零总量检测,如表1中可以看到,病毒高峰值样本浓度相关的衣壳ELISA结果。

图1:三对三种样品重复测量所示:图一,写明ATCC AAV2参考样本,图B -艾尔建AAV样本1和图C -艾尔建AAV样品2。

图2:分布式粒子浓度三重复测量相同的三个样品如图1所示:图C -写明ATCC AAV2参考示例,图E -艾尔建AAV示例1,F -艾尔建AAV样品2。

为了比较变异,%的简历是通过浓度计算的结果为每个重复测量和计算标准差和均值,并从这个计算%的简历。

表1从衣壳ELISA测定浓度数据和MADLS-based粒子浓度结果显示三个样品;写明ATCC AAV2参考样品,爱力根样品1,爱力根样品2。所有浓度作为粒子/毫升。n =显示了我多少的三个重复测量峰值被确认。没有人口峰值呈现它州n /不适用。

比较表1中的结果,写明ATCC AAV2参考示例显示了最大的病毒人口集中值%的简历。这是由于聚集在这个样本的影响如何AAV峰值可以确定。如果你比较峰值大小可重复性在图1中,与其他病毒的人口峰值在图1 b或c,可以看到,后者覆盖更好、更可重复的。这将直接影响浓度测量的可重复性。都爱力根AAV样本显示峰值大约15%的可重复性,在面前没有或几个样本总量。

结论

提供的数据表明,Zetasizer超MADLS-based的粒子浓度可以提供AAV病毒样本的大小分布,因此报告样本聚合状态,以及提供信息的主要病毒的浓度任何聚集人口和礼物。每个重复测量只需要不到4分钟。

样品可以保持封闭整个测量在试管内,所以污染的风险是最小的,暴露在运营商的风险最小化。

最后需要注意的一点是,在测试过程中发现,重要的是要使用正确的样品粘度,保证最精确的测量粒子的浓度。分散剂使用粘度计可以测量粘度或Zetasizer超仪器本身使用大小参考珠子[1]。

引用

[1]确定分散剂粘度使用动态光散射;莫尔文Panalytical应用注释