实时监测膜联蛋白V方法程序性细胞死亡

我们开发了一个齐次luminogenic膜联蛋白V结合分析法检测细胞凋亡的发生实时使用多模板读者。检测试剂有两种不同的膜联蛋白V融合蛋白工程包含补充域的二进制荧光素酶的底物荧光素酶和细胞不透水fluorogenic DNA染色检测细胞坏死。annexin-luciferase片段融合对只有温和的对彼此的亲和力,因此发光仍然很低的可行的细胞。膜联蛋白V时融合蛋白结合在靠近凋亡细胞的磷脂酰丝氨酸暴露在表面,形成一个活跃的酶的荧光素酶片段重组,产生发光。试剂直接添加细胞文化提供一个均匀的协议,它不需要细胞洗涤步骤通常需要用荧光膜联蛋白V绑定用于流式细胞术分析。实时的方法已被用于监测细胞凋亡和二级坏死在几个模型的动力学系统通过不断记录发光和荧光从同一样品的细胞。