自动荧光检测和成像在活细胞中RNA的物种

细胞内RNA水平的确定是一个关键的组件在阐明活细胞外部刺激的细胞反应。许多传统的技术用于RNA定量涉及转染,费力的样品制备和RNA扩增,可排除大样本数据。然而,疾病指导研究,这常常涉及化合物库的筛选,依靠快速的能力对大量样本作化验决定。同时表型信息也需要评估真正的细胞反应。为此,有多个荧光探针能够同时检测不同细胞在活细胞中rna是特别重要的。

在这里,我们描述了使用微型板块结合读者和成像仪检测RNA水平变化使用一系列的金纳米颗粒荧光探针(SmartFlare™探针从EMD微孔)。多模微型板块的读者能够数码显微镜和常规微型板块检测。探测器由一个金纳米粒子共轭双链寡核苷酸的多个副本。长链互补的RNA的目标是缩短reporterstrand包含一个荧光分子(CY3或CY5)淬火在接近黄金核心。与接触目标RNA记者链取代作为目标链结合其互补链位于调查。位移删除相关的邻近淬火导致荧光。荧光的程度取决于靶RNA的数量。

海拉细胞治疗与积极的和消极的控制探测器,以及探测特定于既定的看家基因RNA表达演示了这项技术的效用。CY3或CY5检测探针可以具体区分使用整个PMT-based决定或多路检测的图像分析。Co-staining与细胞表面标记抗体EGFR受体EGFR受体的结合荧光探针MCF-7和SK-BR-3细胞系的正面和负面的特异性受体分别确认技术。细胞刺激与血清浓度的增加导致剂量依赖性增加GAPDH RNA水平。使用这个硬件试剂组合,几个细胞株筛选细胞系特定RNA的存在与否。