通过高通量细胞介导细胞毒性试验直接细胞计数在微型板块使用荧光技术图像血细胞计数
细胞毒性检测中发挥核心作用等研究免疫效应细胞的功能的细胞溶解的T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤(NK)细胞。传统上,细胞毒性试验已经进行使用
51铬(51Cr)和钙黄绿素释放化验。分析涉及标记肿瘤细胞(目标)和放射性同位素或荧光染料,当目标细胞受到ctl细胞溶解或NK细胞(效应),他们释放标签企业陷入媒体消散。标签的数量在媒体上测量来确定水平的细胞毒性效应物诱导。这些传统的方法可能会产生不一致的结果由于低敏感性造成的可怜的加载效率和高自发释放的试剂。此外,测量放射性或荧光标签在上层清液是一种间接的方法进行分析。在这项工作中,我们演示了一种新颖的高通量细胞毒性检测试验使用Celigo成像血细胞计数方法。利用成像血细胞计数,生活的直接细胞计数荧光靶细胞可以执行,这是一个直接的细胞毒性的评估方法。人类NK细胞从一个健康的捐赠者被用作效应器,和K562(悬架)和IMR32(附着)作为靶细胞。靶细胞都是先用钙黄绿素是染色,和播种在标准的96 - 10000细胞/微型板块。捐献者NK细胞被添加到每个在Effector-to-Target (E: T)比例10:1,5:1,2.5:1、1.25:1、0.625:1、0.3125:1。96板然后扫描和分析使用Celigo成像血细胞计数器在t = 1, 2, 3, 4 h测量目标的%裂解细胞。结果表明增加%溶解培养时间和E: T比例增加。的建议Celigo成像血细胞计数是一个准确而简单的方法对细胞毒性的直接量化,可两个学术和临床研究的一个有吸引力的方法。
51铬(51Cr)和钙黄绿素释放化验。分析涉及标记肿瘤细胞(目标)和放射性同位素或荧光染料,当目标细胞受到ctl细胞溶解或NK细胞(效应),他们释放标签企业陷入媒体消散。标签的数量在媒体上测量来确定水平的细胞毒性效应物诱导。这些传统的方法可能会产生不一致的结果由于低敏感性造成的可怜的加载效率和高自发释放的试剂。此外,测量放射性或荧光标签在上层清液是一种间接的方法进行分析。在这项工作中,我们演示了一种新颖的高通量细胞毒性检测试验使用Celigo成像血细胞计数方法。利用成像血细胞计数,生活的直接细胞计数荧光靶细胞可以执行,这是一个直接的细胞毒性的评估方法。人类NK细胞从一个健康的捐赠者被用作效应器,和K562(悬架)和IMR32(附着)作为靶细胞。靶细胞都是先用钙黄绿素是染色,和播种在标准的96 - 10000细胞/微型板块。捐献者NK细胞被添加到每个在Effector-to-Target (E: T)比例10:1,5:1,2.5:1、1.25:1、0.625:1、0.3125:1。96板然后扫描和分析使用Celigo成像血细胞计数器在t = 1, 2, 3, 4 h测量目标的%裂解细胞。结果表明增加%溶解培养时间和E: T比例增加。的建议Celigo成像血细胞计数是一个准确而简单的方法对细胞毒性的直接量化,可两个学术和临床研究的一个有吸引力的方法。
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