CD45+耗竭方法在骨髓弥散性肿瘤细胞富集中的比较

背景
骨髓(BM)样本中播散性肿瘤细胞(DTC)，频率仅为1 / 1x10⁶细胞，非常罕见。dtc通常采用1-2x10的免疫荧光染色检测⁶单个核细胞(MNC)和连续显微分析。为了提高dtc的检出率，需要分析更多的细胞。由于显微镜下检测这些细胞是非常费力的，因此需要DTC富集策略。在这里，我们研究了三种不同的CD45消耗策略的效率⁺在BM样品中进行DTC富集。

方法
CD45⁺对来自不同肿瘤实体的癌症患者的BM样本进行细胞耗竭。CD45的免疫磁损耗(DYN)⁺使用CD45 Dynabeads对1x107个MNCs进行Ficoll密度梯度离心^®(Invitrogen)与i) 4x10⁷珠/ml细胞悬液(DYNLO)和ii) 1x10⁸珠/ml细胞悬液(DYNHI)。基于抗体的CD45损耗(ROS)⁺/ CD66b⁺cell在1x10上执行⁸BM细胞与RosetteSep^®人类CD45耗尽鸡尾酒(Stemcell Technologies)。对于不同的策略，至少分析了60个样本，计算了损耗效率，并外推了DTC数，以比较各自的方法。

结果
我们能够分别在32.7% (DYNLO)、12.5% (DYNHI)和66% (ROS)的患者样本中检测到dtc。CD45⁺使用ROS可以最有效地消耗440倍的细胞，其次是使用DYNHI 44倍，使用DYNLO 20倍。DTC数值明显较高(p<0.0001)(平均=3.69)，每1x10高达21个dtc⁶细胞。在免疫磁处理过程中，DYNLO样本(平均=0.48)的DTC计数略高(8.33 vs 6.35 DTC / 1x10⁶细胞)与DYNHI相比(平均=0.39)。

结论
在我们手中，ROS程序显示了从BM样品中富集DTC的最佳结果。这种方法可以分析大量的BM细胞，因为它消耗了不需要的CD45⁺细胞效率最高，从而提高了患者样本中的DTC检出率。