识别新的打击化合物使用高通量与SMA患者表型屏幕iPSC-Derived运动神经元

脊髓性肌萎缩(SMA)是一个可继承的婴儿死亡率的原因,特点是低运动神经元的损失和骨骼肌萎缩。运动神经元的变性是由水平的不足引起的运动神经元存活(SMN)蛋白质,它是由两个几乎相同的SMN1和SMN2基因编码。大多数情况下SMA的港口SMN1基因的纯合缺失和SMN2至少保留一个副本。因此,一个有前途的治疗策略是上调的全长SMN蛋白水平源自SMN2基因。发现药物筛选平台通常使用SMA纤维母细胞或淋巴细胞,然而,确定分子经常在SMA小鼠模型功效有限,尤其是拯救运动神经元变性(MN)。因此,MNs应该使用SMA患者早期药物发现增加识别有效的小分子治疗的可能性。在BrainXell,我们建立了新技术快速区分SMA患者诱导多能干细胞(万能)大量的神经元。我们还利用基因组编辑与nanoluciferase开保险丝SMN2 (NLuc)记者,使大规模筛选(高温超导)监控SMN的表达水平48 h后每个化合物接触。分析适应满足高温超导的要求,包括:大型批量大小,1536 -格式,最小的井间变异,短期文化、电镀自动分发器,低试剂卷。应用定量高温超导的方法,我们筛选LOPAC,人大和MIPE库(> 6000种化合物)以剂量依赖的方式。 After demonstrating feasibility, we expanded the screen to the larger Genesis library (~95,000 compounds) in order to identify novel hit molecules. Compounds that increased SMN2 expression by >20% were considered hits. Analysis of the combined ~100,000 compound qHTS identified 81 hit candidates, which were rescreened in triplicate. Ten compounds increased SMN2 expression by 20% with EC50 <10 μM. We then used an ELISA to validate the increased SMN2 expression after 48h treatment. This screening paradigm identified and validated at least one new hit compound that has promising efficacy, but the potency will require optimization.