迷人的小分子核糖核酸合成crRNAs使用CRISPR-Cas9系统与配对

CRISPR(定期聚集空间短回文重复)-Cas9 (CRISPR-associated 9)系统来源于酿脓链球菌使用Cas9核酸酶由导游RNA (gRNA)来创建一个DNA双链断裂(双边带)目标站点。gRNAs可以双合成分子,像本机细菌系统包含一个CRISPR RNA (crRNA)和trans-activating CRISPR RNA (tracrRNA)(图1),或一个合成RNA (sgRNA)。争端解决机构通常是通过修复nonhomologous结束加入(NHEJ)或同源性定向修复(HDR)通过内生机制在哺乳动物细胞内。NHEJ会导致插入或删除(indels)生产功能性基因淘汰赛中通过无意义突变或引入一个终止密码子。当使用CRISPR-Cas9组件定位编码基因,通常有多个protospacer相邻主题(PAM)序列(链球菌NGG)可供选择的基因设计gRNA。对于大多数CRISPR Cas9基因组工程实验,一个针对gRNA足以生成所需的功能基因敲除。然而,对于某些应用程序,它可能有利于使用两个gRNAs产生更大的删除,确保基因敲除或移除一个外显子,长非编码RNA (lncRNA),或转录监管元素。