Western Blot实验失败的代价

考虑实验室费用并不像研究你最喜欢的信号通路那样令人愉快。然而，由于研究资金很难获得，所以在选择用于western blotting的试剂时应该考虑到这一点。牢记主抗体的质量是有意义的，因为整个实验的成功取决于抗体的可靠性、特异性和敏感性。如果抗体没有像预期的那样发挥作用，你的实验可能会失败…western blot失败的代价可能比你想象的要高。

抗体价格、验证程度和支持数据的质量在供应商之间差异很大。大公司通常以其产品的广度而自豪，但这些来源的抗体的可靠性、特异性和敏感性可能达不到您的期望。相反，你可以从生产抗体的公司选择抗体内部验证自己的抗体并且不遗余力地与你分享数据。特征不正确的抗体可能缺乏特异性，导致假阳性结果，或者不够敏感，导致假阴性结果。更糟糕的是，如果没有适当的控制，抗体的失败可能并不明显，您可能会根据错误的结果继续项目。

在样品准备和运行印迹之间，西部片可能是耗时和昂贵的。准备样本的成本可能会增加，特别是如果使用组织样本或原代细胞培养。例如，从实验动物身上提取的样本有隐含成本，比如住房成本。除了实验的实际时间之外，动物成熟可能需要几周的时间。这意味着样本收集最终可能会花费数千美元，并需要您花费数周甚至数月的时间。如果在所有这些努力之后，一个不正确的验证抗体导致实验失败，那将是一个悲剧。

一个失败的western blot迫使您返回并执行大量的故障排除。这意味着你必须花费时间和金钱来优化实验条件，例如滴定抗体，这样你就没有那么多时间花在其他实验上了。与此同时，你宝贵的拨款正在消失。由于这些原因，使用一种你第一次和每次都能信任的抗体是很重要的。为了确保这一点，你的抗体应该是充分验证并且有一个已知的最佳稀释度。为了降低失败的风险，您可以自己验证您的抗体，确保它符合以下要求:

•使用对照细胞/组织在预期分子量下的清洁带
•通过以下一项或多项确认的特异性:

•通过滴定确定最佳稀释度

这涉及到运行多个western blot，可能需要购买额外的试剂，这可能是昂贵的。或者，您可以从满足上述标准并与您共享高质量数据的供应商处购买抗体。这些被证实的抗体最大限度地提高了western blot成功的机会。最终，这将帮助您获得可靠的数据用于发布，并以更低的成本更快地推进项目。

购买特性差的抗体最终可能会花费你很多钱。不要浪费时间和金钱，你可以把它花在下一个实验上。购买你可以信任的完全有效的抗体。

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Claire Standen，博士，CST的科学作家和编辑。