像专业人士一样移液的10步!

移液管是一种必不可少的实验室工具，用于分配液体。虽然移液管可以简单地用作液体传输设备，其中实际分配的液体体积并不重要，但更多情况下，它们需要分配精确和精确的溶液体积，这可能是实验程序的关键。有许多移液管制造商和许多类型的移液管是专为所有应用，容量范围从0.1 μ L到100 mL或更多。如果你要分配大量的样品溶液，你可以使用重复移液器和多通道移液器，它非常适合将样品分配到盘子中;特别适用于高通量测定。在本指南中，我们将强调10个重要因素，将帮助您提高移液技术，并确保准确，可重复的结果!

识别移液管

如果符合良好实验室规范(GLP)或良好临床规范(GCP)的规定，那么你所有的移液器都应该有一个唯一的标识符，通常这将包括它们用于的区域或试验和一个编号。所有移液器信息应集中保存，并包括所有在流通的移液器的列表，制造商和型号，序列号和您分配的唯一标识符。

移液管计量的所有细节，其使用历史，任何故障和维修也应存储在这里，因为监管机构可能希望在检查期间查看这些信息。

校准你的移液管

移液管应该按照你的工作指南定期校准。为了有效校准，请使用制造商规定的最低和最高体积。这种校准可以使用4位天平进行水称重;对于小于10 μ L的体积，需要5位平衡，或者可以使用放射性溶液。一旦完成校准测量，应计算精度和精密度。一般来说，精度应在预期重量或放射性计数的3%以内，精度应在2.5%以内。经常检查实验室的SOP以获得准确的验收标准。

如果移液管计量失败，有很多事情可以做。首先，检查你使用的吸管头是否正确，并且是否正确地放在了吸管上。确保尖端没有损坏或泄漏，并且在移液时没有气泡存在。如果在进行这些检查后，校准仍然失败，请另一个人进行校准，以确保没有操作员错误。如果移液管仍然故障，可以拆开(按照制造商的说明)，用水清洗，或添加移液管油脂以改善移动。如果移液管仍然无法校准，建议将其发送给制造商或服务提供商进行维修。

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对于给定的体积，哪种移液管是最好的?

可变体积移液管的精度在最大体积时是最大的，因此为每种应用选择正确的移液管是很重要的。通常的做法是只使用移液器最大容量的20-100%的容量范围，这意味着您永远不会使用移液器的最低容量(通常是10%)-这限制了使用移液器在其下限时不准确的风险。理想情况下，你要选择的移液管体积是移液管范围的50-100%。

吸管技巧

确保您为所选的移液器选择正确的移液头。大多数移液管尖端可以在袋子中提供或设置在架子上更容易/更方便的使用。打孔头可以提供无菌的和非无菌的，有些会规定，例如，在特定的应用场合，RNAse是免费的。选择最适合你的应用程序的提示-袋装提示更便宜，无菌成本比非无菌!确保您使用的移液管尖端与您使用的移液管的制造商和型号兼容。

当使用空气位移移液管处理样品时，对于必须保持无菌的样品(如血浆和细胞培养物)，或对交叉污染敏感的样品(如下一代测序库制备)，您可以使用内置过滤器的尖端，以防止液体吸入移液管桶。这可以防止移液管被您的生物样品污染并转移到其他样品。

理想情况下，您希望在样品之间更换移液管尖端以避免污染，然而，如果您正在准备校准线之类的东西，您可以使用相同的尖端，在这种情况下，建议您在提高浓度范围时用每种溶液启动尖端。如果您正在降低浓度范围，或者如果您正在移液未知浓度的样品，那么在样品之间总是更换您的尖端，以防止任何污染。

空气位移移液管

在空气位移移液器上，柱塞被压低以抽取和分配液体。操作包括将移液器置于空气中，同时将柱塞压至第一个停止位置。然后将移液器尖浸入待移液液体中，柱塞缓慢释放，将液体吸入移液器尖。然后通过按压柱塞到第一个停止位置，然后第二个停止位置(也称为“吹出”位置)，将液体分配到接收容器中，以排出移液器尖端的所有液体。排空的空气体积等于吸入液体的体积。

正位移移液管

正位移移液管，就像注射器一样。一次性活塞与试样之间无气垫。在没有气垫膨胀或收缩的情况下，吸气力保持不变，不受样品物理性质的影响。这使得正位移操作人员移液非常粘稠或高密度的样品，如甘油和血液。

移液技术

一旦你为你的样品选择了最合适的移液管，并确保正确的移液管尖端是打开的，你就可以开始了。

• 首先，用你想要转移的溶液/样品对尖端进行2-3次预润湿。
• 将吸管尖端浸入你想要移液的液体中——这应该足够低于半月板，这样你就不会吸入空气，但也不要太深，以至于液体液位超过了移液器尖端的顶部。
• 吸入后，将笔尖留在液体中几秒钟，以确保笔尖完全充满。
• 在抽吸过程中，尽量将移液管垂直地放在液体中，置于容器的中心，而不是触摸两侧。如果有任何液滴在移液管尖端的一侧，可以使用容器的边缘或用无棉绒的布擦拭，确保不要擦拭尖端的开口，因为这可能会导致样品的损失。
• 在分配液体时，将移液管保持轻微倾斜而不是垂直，并对着接收容器的一侧进行分配。观察样品离开移液管的尖端，当你从容器中取出尖端时，确保尖端的末端没有液滴——如果有，再次将尖端接触接收容器的一侧，这样液滴就会转移。
• 试着在样品之间以缓慢和一致的速度抽吸和分配，因为这将更有可能给出一致和可重复的结果。

哪种移液管最适合我的样品?

无论您需要的体积如何，样品的性质直接影响精度和准确性。空气位移移液管将更好地用于含水液体，而正位移移液管应用于问题液体。



照看你的移液管

移液管如果沾上样品，应用软布和水清洗。在无菌环境中使用或服务之前，也可以喷洒IMS或乙醇来清洁它们。不能使用有机溶剂清洗移液管的内部部件，因为这可能会导致损坏或腐蚀。不使用时，最好将移液器垂直存放;在移液架或转盘上。如果移液器掉落或被拆开，在使用前应再次校准。

如果在实验室工作，需要进行各种不同的程序，那么为不同的应用设置不同的移液器是一个好主意。例如，拥有一套专门用于放射性工作的移液器可以消除其他移液器和实验室其他区域被放射性污染的风险。使用单独的PCR或细胞培养组也可以降低交叉污染或将任何感染引入样品的风险。

意想不到的结果

有时，即使我们做了正确的事情，我们的样本也不会像我们希望的那样表现，我们没有得到我们期望的结果。这可能是由于我们正在移液的溶液中化合物的性质，例如化合物可以粘在移液器尖端或样品容器上。你可以做一些事情来尝试消除这种情况。至于容器，你可以尝试不同的塑料(例如低结合材料)，玻璃和盐化玻璃。使用移液器尖端，您可以多次启动/润湿尖端，以确保化合物将在启动期间粘附，从而导致在转移样品时移液的正确数量。您也可以使用低保留尖端设计排斥样品移液，从而防止粘附到尖端。大多数制造商为他们的移液管提供了一个变种。