自我表征蛋白质和蛋白质协会(寡聚化)SEC-MALS

随着生物制药市场继续增长速度超过小分子药物市场的需求工具的详细描述蛋白质也越来越多。特别感兴趣的是要求描述蛋白质self-association,或寡聚化。尺寸排阻色谱法经常被当作工具来监控齐聚反应,但可以使用单个探测器时不准确。单一探测器色谱法适用于符合典型的球状蛋白质分子量列校准曲线。然而,低聚物(甚至一些单体)不一定是球状结构,因此其分子量不能准确地确定使用这种方法。
介绍了光散射检测器以来,他们已经见过几个不同的开发迭代。现代系统现在基于文化、/ lal单一角度方法或发作(多角度)的方法。所有有能力测量的绝对分子量蛋白质,独立于他们的保留体积。这允许低聚物和较大的骨料容易识别基于光散射信号直接关系到他们的分子量。光散射检测器必须结合浓度探测器。紫外线是最常用的检测器测量蛋白质浓度、示差折光检测器有优势。特别是蛋白质dn /直流(蛋白质折射率增量)大约是常数,尤其是相比,dA /直流(蛋白质紫外反应),这是高度可变的。这大大简化了浓度和分子量测定。

在这张海报,一系列的蛋白质及其低聚物的特点用SEC-MALS紫外线和RI检测。单体的分子量测定和比较与列校准。寡聚物的分子量也较列校准和探索的差异。可以看出,光散射检测器的使用,极大地提高了分子量的准确性,从而确定数量的信心为特定的寡聚物。