P450在低温贮藏肝细胞诱导PXR核受体淘汰赛老鼠和汽车

在这里,我们报告低温贮藏肝细胞的分离和初步鉴定男性PXR和汽车淘汰赛(SD)老鼠和PXR /汽车双基因敲除(SD)大鼠(地平线发现- SAGE实验室)。我们成功的隔离和低温贮藏三种基因敲除模型的肝细胞,产生肝细胞高(> 80%)的可行性和plateability。野生型和基因敲除老鼠的低温贮藏肝细胞培养评价基因表达的存在和缺乏PXR和汽车配体。低温贮藏的肝细胞恢复使用UCRM (IVAL Inc .)和镀在24-well collagen-coated盘子。支流附近的肝细胞形成单层文化与上皮形态典型的主要培养大鼠肝细胞。培养过夜后,媒介改变了鼠肝细胞蛋白自由感应介质(RHIM IVAL Inc .)。第二天的肝细胞治疗与PXR-ligand pregnenlone-16α-carbonitrile (PCN)以及基督教民主党(CAR-ligand 3, 3ʹ,5、5ʹ-tetrachloro-1, 4-bis (pyridyloxy)苯(TCPOBOP)。我们的结果表明,PXR Cyp2b2 PCN-activation所需,Cyp3a23/3a1, Cyp3a18, Cyp2c11和Slco1a2 (Oatp1a2)基因表达,和那辆车所需TCPOBOP-activation Cyp2b2 Cyp3a23/3a1基因表达,在良好的协议与数据从体内大鼠获得淘汰赛models1,人类主要的肝细胞,核受体淘汰赛细胞系和鼠标淘汰赛模型。因此PXR和汽车的肝细胞基因敲除老鼠代表一个有用的体内体外补充药物开发模型和工具,特别是对于涉及核受体的功能代谢途径的研究。