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健康研究公司宣布Cut-N-Glow作为一种新的蛋白酶传感、映射和检测工具


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当病原体存在时,Cut-N-Glow会触发绿色荧光“辉光”。可以使用荧光计定量跟踪光发射,或在检测溶液变绿时用肉眼定性跟踪。

除了在蛋白酶存在时发射荧光信号的优势外,Cut-N-Glow,顾名思义,是设计有条件扭曲将自组装的GFP蛋白转化为特定位点的蛋白酶开关。我们的扭曲方法是可逆的,通过蛋白水解,通过蛋白酶敏感系链eglin C约束GFP 11的N和C端。我们的系统区别于其他GFP报告的特点是,无论在体外还是体内,在蛋白水解中荧光都是增加的,而不是减少荧光。

Brain Callahan博士说:“我们的检测方法很容易通过标准克隆技术来检测不同特异性的蛋白酶,识别蛋白酶抑制剂,或在体外或体内绘制蛋白酶底物偏好图。”“它也很高效,而且价格实惠。不需要化学合成辅助因子或辅助底物。你只需要两种试剂,这两种试剂都是大肠杆菌过表达后容易获得的蛋白质。”

由于其操作简单和体外/体内多功能性,Cut-N-Glow系统具有巨大的潜力,可作为基于蛋白酶的疾病检测的人类临床诊断和蛋白酶研究的工具。

人类临床诊断应用包括:1)在微生物感染中检测基于蛋白酶的疾病,如结核分枝杆菌、肉毒梭菌、霍乱弧菌、微小隐孢子虫、恶性疟原虫和克氏锥虫;2)检测与癌症相关的分泌蛋白酶,如人klikrien -3,俗称前列腺特异性抗原(PSA);3)检测HIV蛋白酶,监测艾滋病治疗情况;4)检测细胞相关基质金属蛋白酶(MMPs)参与组织重塑,如形态发生、血管生成、肝硬化和关节炎。

作为蛋白酶研究工具的潜在用途包括:1)识别被特定蛋白酶切割的肽序列(底物发现);2)确定负责切割特定肽序列的蛋白酶(蛋白酶发现);3)识别蛋白酶变体,通过突变创建,在用户定义的肽序列上裂解(蛋白酶进化);4)色谱组分或实验室缓冲液中特征蛋白酶的检测(蛋白酶检测)。
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