购买时需要考虑的一个等温滴定热量计|莫尔文Panalytical - 188bet金宝搏手机网页,188金宝搏备用

等温滴定热量计的物理组件和特性(ITC)仪器和技术规范时显然是重要的考虑购买一个新系统。然而,编写规范可以被混淆,误导和实际上可能很少影响仪器的实际表现。规范,在纸上,并不一定转化为优势或劣势时对你的样品进行测量。

这里有一些问题你应该问你自己当你开始评估等温滴定热量计。

介绍

的物理组件和特性等温滴定热量计(ITC)仪器和技术规范时显然是重要的考虑购买一个新系统。然而,编写规范可以被混淆,误导和实际上可能很少影响仪器的实际表现。规范,在纸上,并不一定转化为优势或劣势时对你的样品进行测量。世界上最好的组件和技术规格并不重要,如果仪器不是组装或优化的方式转化为真正的改进数据质量和易用性当你正在与你的样品。

这里有一些问题你应该问你自己当你开始评估等温滴定热量计。

的主要区别是什么工具,我需要了解吗?

所有供应商都有自己的行话和他们喜欢的方式展示他们的规格和乐器。然而,所有考虑ITC仪器必须从您的应用程序需求的理解以及如何规范和特性的影响。

1。样本消费对你重要吗?

一种流行方式评估的灵敏度乐器噪音是比较规范。这似乎合理,但这些值是很难从一个供应商到另一个比较每个将定义噪声不同。重要,相关因素要牢记;

1 /基线的变化在一个典型的注入和持续时间

2 /你如何准确衡量注射峰的面积。

好的ITC绑定曲线是由一系列注入加热和准确性等,这些峰的面积可以直接影响测量的值K_D和其他参数(参见图1)

图1:比较ITC注入峰值。峰的面积左边是直接测量,因为一个基线可以开始点和结束点之间的峰值。右边的峰的面积是难以衡量满怀信心,因为开始点和结束点的峰值是很难确定的。

尤其明显的工作时在低浓度样品当最小化样本消费很重要或者测量紧密的关联互动。(见图2)

图2:一个好的和坏的ITC等温线。当峰面积可以准确测量更有可能的是实验数据点适合安装绑定等温线。实验的山峰在左边的数据用来获取数据更容易辨别,在右边的数据。应该注意,而右边的数据是分散的,仍有可能产生亲和力和其他热力学数据,然而目前尚不清楚如何准确的数据。

基线的变化(见图3)从一些供应商可以看起来好,但通常情况下,原始数据之前经历了一轮主观操作分析的过程。

图3:短期内噪声和漂移的例子。左手上的绿色线条图显示两个短期内噪声的例子。更高的数据集有较高的噪音。然而要么会好测量峰地区典型的ITC数据。然而黑色线条展示伟大的短期噪声(几秒),但高度在2到3分钟的范围内变量ITC峰的宽度和最大影响测量峰面积数据准确。图片右边显示数据与漂移。尽管漂移不美观,如果它不影响准确测量峰值区域就可以适应没有损害安装的质量参数。

这不仅是很耗费时间的过程,但或许更重要的是,增加了不确定性在K_D数据和其他参数。当比较ITC工具就好了在低浓度测量峰面积测量的准确性可以非常考验。理想情况下,这个过程应该执行自动但最具挑战性的情况下。你应该确保你试试这个过程,这样你十分清楚的过程。程序的健壮性应该评估通过比较产生的亲和力和其他热力学参数重复实验。

2。是可重复的数据对你重要吗?

有很多因素可以导致获得可重复的数据,即使在较高的浓度进行测量。一个因素是清洁的注射器。良好的实验室实践干燥实验之间的喷射注射器。没有干燥的注射器很容易稀释你的配体与水或缓冲材料用于清洁它。甚至2µl水留下的注射器将稀释你的配位5%,这个错误将直接影响测量的焓相同数量的互动。寻找一个量热计,允许简单的冲洗注射器与甲醇和随后的干燥。

另一个因素是注入可重复性。你的量热计精度应该有一个吸管,可以提供非常低的可重复性高。

图4:一系列注射2毫米琥珀酸滴定到20毫米氢氧化钠。一组六个注射在7个不同的注射量测量注入热吸管的可重复性。1.5µl注射的注射重复性优于1.5%。

3所示。用户友好的工具和软件如何?

用户界面的软件和硬件应该评估。理想情况下,这两个注射器加载和干燥应该快速和容易。细胞应随时可见的援助在装货港样品到量热单元和确保气泡不引入实验。

软件的易用性,至少同样重要。用户友好的眼睛情人眼里出西施,所以看看对你来说最重要的特性。最好的方法是运行仪表和执行数据分析自己。通过向供应商发送样品的实验室和接收报告后在未来一段时间将不会帮助你理解如何操作乐器,运行一个示例或分析数据。要求使用软件并运行一个实验两个从开始到结束。你会很高兴你,因为只有这样才能为你真正了解用户友好的工具和软件。

4所示。你想最大化数量的实验可以运行在一天?

仪器的响应时间会影响样品消耗和时间进行实验。响应时间可以以不同的方式计算由不同的生产,然而,很容易比较仪器的响应时间仅仅通过比较需要多长时间运行,建立实验。响应时间越快越实验可以在一天内运行和在许多情况下,它减少了样品的要求。

如果你预见到需要好的数据量热生长在你的实验室,那么你还应该考虑一个供应商,提供自动化仪器和可能升级你的仪表自动化平台。

5。你需要能够测量范围广泛的亲和力?

测量紧密互动的亲和力在ITC需要使用低浓度样品。因此,这些都是最具挑战性的实验和要求仪器能够准确测量小热。仪器的能力取决于许多因素,其中一些已经在本指南中提到,如基线变化和响应时间。它也取决于你的绑定过程的固有热想措施。当检查仪器是否适合测量紧密互动有几件事情你应该寻找。首先是工作在低浓度样品看看亲和力的差异你来自重复实验。第二是检查文献,你应该找发表的数据显示,这些交互作用和良好的重复性最好显示绑定等温线本身,而不是用数字表。好的文学的例子包括Lulf et al . 2014(1.6海里)¹Ramakrishnan et al . 2012(2.5海里)。²

测量弱相互作用需要在较高的浓度。在这种情况下你应该找仪器易于负载,以减少加载错误,需要重新测量。

6。你需要适应范围广泛的应用程序?

您应该检查仪器为您的特定应用程序的能力。例如,黄金热性能,使其适合测量热量。然而,如果你想测量二硫化与蛋白质的相互作用,你应该选择细胞量热计,这并不与硫醇组。建立在文学,硫醇,二硫、硫醚交互强烈用金子包裹³。强sulphur-gold交互使密集的自组装单层的形成⁴。这个绑定可能会干扰你的结果。此外,与黄金是强大的,需要严格的清洁如果你是防止细胞成为涂以蛋白质和污染后续实验。