GTPase的生物荧光检测可以测量GTPase, GAP和GEF活性

GTPases在细胞信号、细胞增殖、细胞分化、细胞骨架调节和细胞运动等多种细胞功能中发挥重要作用。这些蛋白质的失调或突变会导致严重的病理状况。由于缺乏方便的检测方法，靶向gtpase及其监管机构一直具有挑战性。为了克服分析GTPase及其调节蛋白GTPase激活蛋白(GAP)和鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)活性的挑战，我们开发了一种同源生物荧光分析(GTPase- glo)系统，以简单、方便的“添加-混合-读取”格式分析这些蛋白质。

该方法由优化的反应缓冲液组成，允许GTP酶循环和GTP水解的持续进展。该方法依赖于GTPase反应后剩余的GTP酶转化为ATP和ATP的生物荧光检测。结果表明，该方法在分析固有GTPase-活性、GAP-激发GTPase-活性、GAP-活性和GEF-活性时具有较高的灵敏度和鲁棒性。当使用LOPAC文库(药理活性化合物文库)对化合物干扰进行测试时，该方法具有最小的错误命中率，这表明使用高通量筛选识别GTPase小分子调节剂的鲁棒性