文摘

许多依然重要的微生物过程、药物和生物标志物发现需要在蜂窝网络对蛋白质功能的理解。破译蛋白质功能创建高需求为生产大量纯化的蛋白质产生足够的蛋白质晶体学,映射的蛋白质-蛋白质相互作用或开发亲和试剂对感兴趣的蛋白(抗体,寡核苷酸适配子)。

因此,健壮的高通量蛋白表达和纯化过程需要开发,以满足这一需求。我们已经开发出一种高通量表达式包含hexahistidine亲和标记的重组蛋白在大肠杆菌在倪一步亲和纯化的蛋白质^{2 +}琼脂糖珠。

感兴趣的基因被克隆的使用自动化高通量克隆。蛋白质表达使用的大肠杆菌生产菌株的规模800毫升/克隆使用Bactolift™(Lofstrand)或25 ml /克隆50毫升猎鹰管。蛋白质纯化IMAC在倪^{2 +}从原油溶解产物琼脂糖使用过滤低吞吐量更高收益率的自动化过程基于BioRobot 3000(试剂盒)或使用基于磁分离的高吞吐量,低收益率自动化流程Biomek FX™机器人(贝克曼库尔特)。

因此蛋白质纯化的工艺参数组12或96蛋白质相比,分别。虽然两个过程为蛋白质提供了类似的纯度Biomek-based过程在技术上更加容易,更高的吞吐量和更少出错。使用这些流程自动化高通量毫克量的纯化重组蛋白的生产进行了探讨。