siRNA筛查:达到分层策略的发展

而合成siRNA库是强大的工具功能基因组屏幕,脱靶效应由核种子与3 ' UTR意想不到的目标会导致假阳性。鉴于一些化验脱靶效应的频率,达到验证/分层策略的发展势在必行。在接下来的研究中我们将为识别高信心的两种策略:1)多个试剂的方法,两个或两个以上的个人siRNAs引起相同的表型和2)化学改性方法,点击确认是通过使用池核含有特异性提高修改。比较这两种方法(使用一组主支安打从细胞生存能力生成屏幕)揭示了高信心明显的重叠点击确认。然而,对于信心不足,即单个核诱发表型,担心的是,一个重要的打击将会错过。以确定表型是由于基因打靶或seed-mediated脱靶效应,嵌合的方法使用,gene-specific种子序列引入一个新核脚手架。在一起,这些数据提供了定义良好的方法优先级的来自RNAi屏幕。