成功改善RNAi筛查策略:使用Ubiquitin-EGFP化验确定制药蛋白酶体功能所需的基因

核糖核酸干扰(RNAi)屏幕代表一个有效的方法来确定新的治疗靶点,并阐明机制的行动或对药物的敏感性。尽管其巨大的潜力,RNAi筛选提出了独特的挑战,必须加以解决,以确保成功。我们将描述使用的策略,提供有意义的筛查结果。作为一个案例研究中,我们将讨论使用ubiquitin-EGFP细胞系的细胞试验筛选基因,当沉默抑制蛋白酶体功能和/或影响细胞的生存能力。我们将描述小干扰rna分子的方法用于确保有效传递和识别健壮的核控制。我们还将提供策略用于验证RNAi自动化平台的兼容性与表型分析。最后,我们将讨论常用的数据分析和识别方法以及后续的分析方法从初级筛选的潜在冲击。