CRISPR干扰

CRISPR干扰(CRISPRi)是一种新颖的方法击倒的特定基因。CRISPR,没有减少。地平线CRISPRi系统使用一个停用Cas9核酸酶(dCas9)融合到我们的专有SALL1-SDS3目标基因的转录抑制因子构建阻止,没有切割DNA。地平线CRISPRi系统需要两个组件:一个专业dCas9融合阻遏蛋白(SALL1和SDS3),和一个导游RNA专门设计针对该地区立即下游基因的转录起始点(TSS)。指导同事dCas9-SALL1-SDS3和指导复杂DNA目标站点。层提供了慢病毒和瞬态方法抑制蛋白和导游的介绍。本机Cas9 DNA-cutting功能已经被点突变,和停用Cas9 (dCas9)蛋白质已经被融合进一步改造基因镇压地平线的专有SALL1和SDS3阻遏域。地平线上发现许多阻遏构造创建dCas9-SALL1-SDS3融合之前进行测试。虽然许多当前CRISPRi系统依靠dCas9-KRAB变体(吉尔伯特et al ., 2013年,杨et al ., 2018年,Moghadam et al ., 2020年,Alerasool et al ., 2020),我们的小说阻遏,共价链接到dCas9蛋白,进一步抑制靶基因转录招聘蛋白质参与染色质重塑和基因沉默(Alland et al . 2002年)。结果是一个广泛的功能抑制因子,将基因表达但不掉。CRISPRi dCas9-SALL1-SDS3可以作为瞬态mRNA表达或慢病毒粒子为创建dCas9-SALL1-SDS3稳定表达细胞系。