修改CRISPR-Cas9纠正镰状细胞突变
基因组编辑使用CRISPR-Cas9系统有着巨大的承诺在人类细胞治疗的基因错误修正。之前采用医学治疗,安全隐患有关脱靶效应必须最小化降低风险可能带来意想不到的行动在网站的系统类似,但不相同,目标站点所需的基因。在今天刊登在《自然医学》上发表的一项研究中,研究人员在综合DNA技术实验室(IDT)和斯坦福大学教授马修Porteus描述小说Cas9突变表明改进的高特异性和维护活动时用于医学上相关的核糖核蛋白(RNP)格式。医疗用潜在的新突变酶在人类造血干细胞和祖细胞(公司),它能够正确beta-hemoglobin基因的突变负责镰状细胞病(SCD)。
几组前所述Cas9与提高特异性突变体。然而,所有显示显著降低活动时用于临床相关RNP格式。这些先前的突变体是使用智能设计开发基于已知的蛋白质晶体结构。相反,IDT科学家使用一种公正的方法来筛选约250000随机Cas9突变体识别那些罕见的突变体,提高特异性不影响活动。经过几轮的选择,一个突变的出现,现在被称为Alt-R HiFi Cas9核酸酶,提供所需的高目标,低非目标特征。在发表的研究中,一个协作的团队从IDT和斯坦福大学展示了强劲的目标编辑和最小脱靶乳沟通过高保真Cas9在几个治疗相关位点hard-to-edit公司。他们也显示HiFi Cas9-mediated校正的镰状细胞致病p。E6V突变patient-derived公司。
马克Behlke,医学博士,首席科学官IDT和这项研究的共同作者,说:“以前尝试改善Cas9特异性突变体使用plasmid-based特征方法,导致持续Cas9蛋白的过度表达,从而增加日常活动和医疗应用程序并不理想。然而这持续的过度,救出了突变体的功能,否则显示低活动使用时更多的瞬态RNP格式。我们专门进行了广泛使用时屏幕识别突变,表现良好在降低蛋白质含量达到RNP交付,最大化安全性和进一步减少不必要的副作用。教授Porteus证明实用程序使用新系统正确SCD正常的人类造血干细胞的突变同时最小化已知的日常活动。我们预期显著兴趣转化医学应用中使用新的Cas9突变。”
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参考:Vakulskas, c。义务,d . P。Rettig, g R。土耳其人,R。雅可比,a . M。,Collingwood m。,…Behlke m a (2018)。高保真Cas9突变作为一个核糖核蛋白复杂使高效基因编辑在人类造血干细胞和祖细胞。自然医学,1。https://doi.org/10.1038/s41591 - 018 - 0137 - 0
