一种合成Homology-directed CRISPR-Cas9系统修复

CRISPR-Cas9正日益成为使用最广泛的基因组工程工具由于其易用性和能力导致双链断裂(双边带)在几乎任何感兴趣的轨迹。细胞homology-directed修复(HDR)途径可以用来引入外源基因的内容,虽然这个应用程序CRISPR-Cas9简单不如利用内生异源端加入(NHEJ)途径创造基因淘汰赛。我们使用合成dual-RNA方法基于自然细菌基因组编辑CRISPR-Cas9系统在哺乳动物细胞,允许快速分析多种化学合成rna。这里我们展示该系统的效用HDR基因组工程应用和改善提供指导CRISPR Cas9-assisted HDR。我们现在的例子和设计建议使用短,单链dna作为小插入捐赠者模板。我们表明同源臂长度的单链DNA供体影响HDR的效率。我们还演示模板质粒DNA供体的使用对于大型插入,用荧光蛋白融合模型。最后,我们概述描述技术和方法精确HDR-generated细胞系的基因工程。