Cas9与人造crRNA和tracrRNA配对时，由最佳启动子驱动的Cas9改善了真核细胞系的基因编辑

随着在细胞基因组特定位置制造DNA断裂的新工具的开发，对哺乳动物细胞基因组工程的兴趣在过去几年中不断增加。在这些工具中，CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas9 (CRISPR associated protein 9)系统因其相对简单和易于使用而获得了极大的兴趣，与其他基因组工程技术相比。CRISPR-Cas9系统需要Cas9蛋白与反式激活RNA (tracrRNA)和基因靶向CRISPR RNA (crRNA)的复合物(图1)，或单个引导RNA (sgRNA, tracrRNA与crRNA的嵌合形式)。

本文介绍了在与表达Cas9的质粒共转染时，使用合成crRNA和tracrRNA引入基因编辑事件的效率的结果。我们探索了使用抗生素和荧光激活细胞分选(FACS)方法来富集经过基因编辑的细胞，以及使用多个启动子来提高使用Cas9和合成tracrRNA和crrna进行基因编辑的效率。