DNA-free CRISPR-Cas9在斑马鱼基因组工程

CRISPR-Cas9系统允许研究人员快速编辑功能的蛋白质的基因敲除在哺乳动物,鱼类和植物基因组,等等,因此极大地改变了生物研究。CRISPR-Cas9系统需要外源性Cas9核酸酶传递到细胞,可以通过表达质粒的转染,信使核糖核酸或蛋白质,或通过与慢病毒转导粒子。dna Cas9结构,适合许多应用程序,可能导致不必要的集成活动。慢病毒的集成交付结果Cas9表达盒进入细胞的基因组,并转染Cas9向量序列的质粒可能导致插入站点的双链断裂通过NHEJ当基因组DNA修复途径。使用Cas9信使核糖核酸或蛋白质避免任何不必要的集成,并结合使用合成crRNA tracrRNA,结果在已经没有dna完全细胞基因编辑系统。这里我们展示成功已经没有dna基因编辑使用细胞CRISPR-Cas9试剂在斑马鱼基因敲除。从一个稳定的转基因斑马鱼胚胎线被注射Cas9核酸酶mRNA,合成tracrRNA, GFP crRNA设计目标。不匹配检测化验证实有效的基因编辑和成功证实了功能的蛋白质基因敲除的GFP荧光损失。