PXR和CAR核受体敲除大鼠冻存肝细胞P450的诱导

在这里，我们报告了雄性PXR和CAR敲除(SD)大鼠和PXR/CAR双敲除(SD)大鼠冷冻保存的肝细胞的分离和初步特征(Horizon Discovery - SAGE实验室)。我们成功地从三个敲除模型中分离和冷冻保存了肝细胞，获得了高(>80%)活力和可平板性的肝细胞。将冷冻保存的野生型和敲除大鼠肝细胞培养用于评估PXR和CAR配体存在和不存在时的基因表达。使用UCRM (IVAL Inc.)回收冷冻保存的肝细胞，并将其镀于24孔胶原蛋白涂层板中。肝细胞形成接近融合的单层培养，具有典型的原代培养大鼠肝细胞的上皮形态。培养过夜后，将培养基改为大鼠肝细胞无蛋白诱导培养基(RHIM, IVAL Inc.)。第二天用pxr配体孕烯酮-16α-碳腈(PCN)和car配体3,3ʹ，5,5ʹ-四氯-1,4-双(吡啶氧基)苯(TCPOBOP)处理肝细胞。我们的研究结果表明，PXR是Cyp2b2、Cyp3a23/3a1、Cyp3a18、Cyp2c11和Slco1a2 (Oatp1a2)基因表达的pcn激活所必需的，CAR是tcpobop激活Cyp2b2和Cyp3a23/3a1基因表达所必需的，这与在体大鼠基因敲除模型1、人原代肝细胞、核受体敲除细胞系和小鼠敲除模型所获得的数据一致。因此，来自PXR和CAR敲除大鼠的肝细胞为药物开发的体内模型和工具提供了有用的体外补充，特别是对涉及核受体的代谢途径的功能研究。