基于慢病毒的microRNAs支架设计、功能和过表达

MicroRNAs是一种短的非编码rna，通过靶向降解一个或多个基因来调节基因表达，已被证明在发育、分化和疾病中发挥重要作用。例如，microRNAs对干细胞功能和分化至关重要。此外，microRNA表达异常与许多类型癌症的发生和进展有关。为了更好地理解microRNA在感兴趣的表型中的功能作用，可以通过将microRNA模拟物引入细胞来进行功能获得实验，这些模拟物反映了内源性microRNA的作用。合成microRNA模拟物的研究在易于转染的细胞类型以及在短时间内容易观察到表型的实例中是有用的。然而，对于难以转染的细胞和在较长时间点发育的表型，需要额外的传递策略。在这里，我们描述了支架设计的策略，并强调了在感兴趣的细胞中选择一个最佳启动子的重要性，以实现基于慢病毒的microRNA模拟物的过表达。我们在难以转染的原代细胞、免疫细胞和神经元细胞(HuVEC、K562、SH-SY5Y)中证明了基因靶点的下调，并通过过表达miR-429在MDA-MB-231乳腺癌细胞中显示了间充质到上皮细胞的转变标记。