提高RNAi筛选成功率的策略:使用泛素- egfp检测来识别蛋白酶体功能所需的可用药基因

RNA干扰(RNAi)筛选是一种有效的方法，以确定新的治疗靶点，并阐明作用机制或药物敏感性。尽管其巨大的潜力，RNAi筛选提出了独特的挑战，必须解决，以确保成功。我们将描述用于提供有意义的筛查结果的策略。作为案例研究，我们将讨论使用泛素- egfp细胞系筛选沉默时抑制蛋白酶体功能和/或影响细胞活力的基因的基于细胞的分析。我们将描述用于确保有效传递siRNA分子和识别稳健siRNA对照的方法。我们还将提供用于验证RNAi自动化平台与正在分析的表型的兼容性的策略。最后，我们将讨论常用的数据分析和命中识别方法，以及初步筛查中潜在命中的后续分析方法。