IgG单体及其聚集物的表征
无论我们是试图改进候选配方,还是试图表征最终配方,确切地知道蛋白质样品由什么组成,以及每种成分的含量是至关重要的。传统上,这些信息的测定采用尺寸排除色谱法(SEC),也称为凝胶渗透色谱法(GPC)。使用SEC,样品组分可以通过分子量进行识别,该过程将分析物分子通过尺寸排除柱或凝胶渗透柱的迁移与一系列已知分子量的标准物的迁移进行比较。此外,只要使用浓度检测器记录洗脱,并知道相关消光系数,就可以简单地从各自的峰面积中提取各组分的相对量。
虽然这是一种成熟的蛋白质表征技术和行业标准,但使用柱校正SEC来测定分子量并非没有问题。其中主要是通过形状依赖洗脱引入分析的不准确性。在本应用说明中,我们使用柱校准和多检测SEC对两个抗体样品进行了表征。在这里,我们展示了两种分析的结果,并演示了多检测SEC(一种将色谱的分辨率与光散射检测器和粘度计的揭示能力相结合的技术)如何提供更准确的数据和所研究的蛋白质混合物的更完整的表征。
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