利用CG-MALS了解抗体和病毒糖蛋白相互作用

病毒糖蛋白通常是在病毒表面发现的唯一抗原，因此，是中和抗体的关键靶点。分析可能发生的不同分子相互作用的类型和亲和力对于理解是什么形成良好的中和抗体以及如何在暴露后治疗和疫苗开发中利用这些相互作用至关重要。

为此，我们首先使用尺寸排除色谱耦合多角度光散射(SEC-MALS)来确定病毒糖蛋白(vGP)的摩尔质量和原生寡聚状态。此外，通过miniDAWN TREOS测量的MALS与同时使用UV和dRI (Optilab T-rEX)测量的浓度相结合，使用蛋白质偶联分析测量vGP的聚糖含量。

接下来，我们使用Wyatt Calypso II和miniDAWN TREOS的成分梯度多角度光散射(CG-MALS)来确定糖蛋白的化学计量学和抗体相互作用的亲和力。自动化Calypso方法包括糖蛋白的浓度梯度来评估自关联特性，如SEC-MALS所示，以及双成分“交叉”梯度来评估异质关联行为。

光散射数据在CALYPSO软件中通过关联模型进行了最佳拟合，该关联模型解释了每个抗体分子有两个等效的糖蛋白结合位点和两个IgGs结合两个二聚体的元复合体。令人惊讶的是，一个在单个vGP二聚体上提供多达两个抗体结合位点的模型并不符合数据，这表明单个表位可能位于二聚体界面附近。