抗体的研究:好的,坏的,验证流行病

的特异性抗体绑定很多研究是非常重要的学科,但是采购最好的抗体研究可能是一个挑战。这部分是因为并不是所有供应商确认他们足够的抗体。这是多大的问题?

为了解决这个问题,我们首先需要定义属性组成一个“好”或“坏”的抗体。至少,一个“好”抗体是专门检测其预期目标在一个特定的分析和实验,实验是一致的或批次。在某种程度上,所有抗体显示非目标(非特异性)绑定属性,可加剧了怎样使用它们(应用程序、协议稀释)。

“坏”抗体,另一方面,被定义为那些非特异性(不要检测目标和意想不到的交叉反应或目标)或不“适用”(不要在目标应用程序)工作。关键是理解,抗体不是天生的“好”或“坏”,但他们是如何筛选,验证,确定其功效用于研究应用。

通常,最初由抗体与抗原免疫动物(肽、蛋白质、完整的细胞、小分子等)。如果操作得当,动物将最有可能产生抗体,检测免疫原的全部或部分,假设它是足够抗原引起的免疫反应。多克隆抗体,罕见的例外,在使用前需要对抗原纯化去除血清非特异性免疫球蛋白的蛋白质和池。

单克隆抗体通常是独立于b细胞克隆选择能力检测抗原。如果筛选和选择得当,这些抗体需要最小的净化。

重组抗体是由使转染的重型和轻型链单克隆抗体在哺乳动物表达系统和细胞还要求最小的净化去除污染物。

因此重要的是要明白,几乎所有的抗体,“好”和“坏”将识别的抗原。更重要的问题是——它们足够敏感,特定的目标和功能检测复杂混合物的其他生物分子所需的试验?

当然,还有抗体受到小的市场上,如果任何测试确认特异性和功能。例如,抗体所选择完全基于ELISA试验是不可能在免疫组织化学工作由于显著差异表达的抗原。然而,如果你所需要的是一个ELISA抗体,然后验证通过ELISA可能就足够了。

不幸的是,一些厂商屏幕抗体的测定和声称的功能。同样,特异性的抗体可以影响的条件——包括应用程序,使用缓冲条件,协议,稀释和孵化时间。

抗体测试和验证了免疫印迹不应该被认为是同样的特定免疫细胞化学、流式细胞术和功能。同样,抗体适用于免疫细胞化学在福尔马林固定的细胞在酒精固定条件下可能表现得完全不同。验证抗体必须确保执行的特异性和灵敏度独立在每个应用程序和协议无论来源。

这个抗体的问题开始大量的抗体可用于研究目的。我们和其他人,估计有超过430万种不同的抗体研究只使用(RUO)市场来自200多个供应商。

研究蛋白质的目标可能有成千上万的抗体,但最差特征蛋白质可能只有一个或两个。甚至考虑需要特定场地测量磷酸化抗体和其他转录后修饰,抗体轭合物和其他衍生品,仍有许多抗体可用于最常见的目标。更糟的是,许多供应商出售相同的抗体。

很可能只有一定比例的抗体可用于任何给定的目标是“好”的抗体——这意味着他们不够有针对性和敏感检测内源性信号至少在一个应用程序。问题是,有太多的抗体,特异性(检测其他目标除了或者代替目标),或不击中(不够敏感检测内源性信号或不工作在目标应用程序)。即使是最好的抗体,如果使用不正确,可以产生不正确的结果。