简化组件选择侧流试验发展

呈现的突出网络研讨会“简化组件选择在侧流试验发展”主持Klaus Hochleitner博士学位。,现在可以查看需求在这里。

侧流试验(lfa跑车)是无与伦比的速度和易用性,然而其发展需要高度明智的决策。需要6 - 12个月从最初的想法和信息的收集,设计验证,与监管机构的批准另一个1 - 2年。选择关键组件(正确的类型的硝化纤维素(NC) membrane-early在以正确的方式,是保持LFA发展正轨的关键,在规范和预算。那么,让我们看看一些详细考虑的组件的选择。

最基本的


有两种类型的LFA化验。第一个是一个非竞争性,或三明治测试用于大分子分析物和两个抗原结合位点,绑定附加到目标,不相互干扰。如果目标是出现在示例中,将会有增加的信号测试线。一个著名的例子,一个三明治测试是一个怀孕测试。

第二种类型被称为有竞争力的测试它用于小分子分析物不有两个结合位点。既然你不能绑定多个绑定到目标分子,你需要使用一个测试线,其中包含你的目标分子。如果目标是出现在示例中,将会有一个下降的信号测试线。竞争测试的一个例子是一个用来测试药物的滥用。

反应膜的关键因素

选择正确的膜通常可以归结为测试设计的本质。值得测试许多变体,同时考虑以下几点:

毛细上升时间

这就是所谓的时间为液体(通常是水)膜表面流动在一个定义的距离(行业标准是40毫米)。所有供应商制造他们的膜毛细管上升时间定义。液体的速度通过测试线和控制线确定测试的敏感性和特异性。lfa跑车等水样品的水和尿液通常使用膜速度慢(170 - 185秒)。测试膜速度快(80 - 100秒)常常被用于更多的浮夸的样本,如唾液和resolubilized固体。

所有膜毛细管上升时间规范有一个上限和下限。虽然大多数膜的制作将中间的范围内,你可能时不时会卷下降接近上限和下限。这可能会导致问题例如,尤其是快速膜你会看到假阴性结果样例跨膜跑太快,而对于减缓膜,你会假阳性信号或膜间隙的问题。在罕见的情况下,您可能会看到问题在边缘规范的限制。你应该测试膜样本的两个边缘在您的开发规范(称为限制样本)。为了做到这一点,你可能需要选择一个膜以不同速度等级(这与你的毛细上升速度感兴趣的)或要求定制的膜,有自己的毛细上升时间规范。

膜的支持

硝化纤维素(NC)膜的生产,原材料都溶解在有机溶剂沸点低于水,倒到固体表面(这可以产生无靠背的或支持膜)。无靠背的膜有一个空气侧和皮带。空气侧的结构是粗糙的,随机的,它可以增加变化,降低蛋白结合能力相比,带边。带边的密度的结构和规律,因此具有很高的蛋白结合能力。支持膜机械强度增加相比,无靠背的膜,但他们只有一个可用的一面——空气的一面。如果你不确定如何选择或新lfa跑车最好选择支持膜由于易于处理。

膜阻塞

数控矩阵是首选由于蛋白结合能力,然而任何硝基并不在测试行可能会绑定到目标分子,严重影响测试灵敏度。为了避免这种情况,你可以阻止自由硝基邻的测试和控制在两个方面:通过涂层膜阻断试剂生产过程(称为“动态阻塞”),或通过整合阻塞试剂样品或共轭释放垫,使他们沿着膜迁移前的样品。后者更成本-时间和效率,然而你没有控制的阻塞试剂适用于膜。

膜表面活性剂

NC膜中的表面活性剂可以影响抗体绑定通过膜更hydrophilic-which有助于调整流率或通过部分变性的蛋白质分子,这有助于固定抗体。不同的供应商使用不同的表面活性剂,应用在生产过程的不同阶段,所以它是最佳实践,为您的特定应用程序测试这些膜在使用它们。固定目标绑定的影响取决于所使用的抗原决定基是线性的(结合目标单一线性肽链)或confirmational(它只绑定目标当多个肽链在附近)。即使成功的固定的机会,由于抗体抗原决定基不可用取向。你应该考虑是否有优先定位块结合位点,这将影响antibody-antigen交互。其次,你应该考虑如何关闭绑定对方一旦绑定到目标;如果他们太近这将会导致空间位阻。抗原决定基映射的表面等离子体共振(SPR)可以检查抗体干扰。

垫呢?

膜的两侧垫一样性能的关键。例如,错误发生在制备共轭垫最有可能导致的问题和你的光阑。

横向流垫	目的	提示
样品垫	之前准备的样品混合共轭。	通常包含试剂保持样本的关键参数,但是也可以涂上缓冲区包含阻塞试剂。
血液分离机垫	只有血液样本,用来减少颜色和干扰(如从DNA)通过删除红色和/或白细胞。
共轭垫	提供了在一致的粒子探测器在膜卷。	重要的是不要浸泡的垫探测器试剂。当干燥共轭垫,确保它保持稳定和破损。
吸收垫(芯)	捕获并保留样品的测定。	吸收能力必须大于样品的体积液体,以避免回流的样本从芯膜。

总之,有很多发展中lfa跑车时需要考虑的重要方面。得到这些参数需要每个组件的详细信息,样本和抗体。我们总是建议开发商与制造商紧密合作,以避免影响到开发过程的常见的陷阱。

问问专家
最常见的原因是什么人未能开发一个可行的测试?

有许多不同的因素。它可以是任何东西,从检测试剂的选择,垫,和膜,支持卡选择或设备设置。每个考虑在开发过程会影响测试的结果,所以重要的是要测试所有这些项目。

为什么一个测试花了这么长时间的发展,例如COVID-19测试?

它可以接受2 - 3年的LFA移动通过发展和临床试验达到市场。好健壮的测试需要至少一年的研发阶段。虽然每个人都尽快工作他们可以在大流行期间,您需要开发和优化分配足够的时间来完成测试需求。

你如何评价基于他们所使用的表面活性剂膜?

并不是所有的单克隆抗体(mab)工作在一个给定的表面活性剂的存在,和2% -3%的马伯不工作。抗体检测在各种表面活性剂在早期发展阶段是优化性能的关键。不同的表面活性剂会影响测试结果(如假阳性,或不敏感)。

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