一个mix-and-read细胞试验对上皮生长因子受体抗体筛查

广泛的抗体蛋白的目标已经批准或目前正在开发的治疗。使用流式细胞仪确定antibody-antigen绑定已经为特征。而流式细胞术已被广泛利用,它需要使用悬浮细胞或贴壁细胞从井里,所以它无法分析细胞原位。此外,随着细胞经过流管,低亲和力抗体可以使分离抗原,抗原的抗体浓度的平衡发生了变化。流式细胞术通常不是一个高通量方法,这种分析。虽然更高的吞吐量系统现在目前,他们仍然需要把细胞从一个盘子可以导致交叉污染,和需要清洗的步骤不适合低亲和力抗体。我们提供另一种高通量的方法观察抗体绑定,主屏幕可以通过运行mirrorball®高灵敏度血细胞计数器来快速识别感兴趣的抗体。

在这里,我们提出一个敏感的健壮,mix-and-read方法筛选的细胞表面蛋白的抗体。的mirrorball®高灵敏度血细胞计数器是用来量化细胞荧光在384孔酶标文化。我们描述其使用测定人类上皮生长因子受体(EGFR)抗体绑定在A549细胞表达高水平的表皮生长因子受体。A549细胞孵化与鼠标anti-EGFR抗体和fluorescently-labelled anti-mouse IgG抗体。没有洗掉的抗体,板块进行扫描和每个细胞的荧光量化。明确浓度较低的抗体绑定观察分析差异性。添加Vybrant™戴奥,一个488 nm-excitable细胞染色,允许检测细胞无论anti-EGFR抗体绑定的数量来提高检测性能。以其操作简单、no-wash格式和高灵敏度,这非常适合高通量抗体筛查新方法。